无标签LC-MS/MS蛋白质组学分析

无标签LC-MS/MS蛋白质组学分析-详情"随着高效液相分离技术（HPLC）和静电场轨道阱（Orbitrap）质谱技术的发展，液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）成为目前蛋白质组学分析的主要技术。基于LC-MS/MS的蛋白质组学技术取得了重大进展，在灵敏度、选择性、重现性、蛋白质覆盖率和成本效益方面的表现越来越好。基于LC-MS/MS的蛋白质组学技术为量化复杂的蛋白质混合物提供了一种高通量的方法，其量化能力比那些基于免疫亲和力的传统量化方法（

蛋白N端糖基化

蛋白N端糖基化-详情"蛋白糖基化修饰是糖链分子在糖基转移酶的催化作用下与肽链氨基酸侧链活性基团反应生成糖苷键，从而使糖链连接到蛋白质上。蛋白N端糖基化是将含有14个单糖的糖链（Glc-3-Man-9-GlcNAc-2）与蛋白质上天冬酰胺（Asn）的酰胺基团以N-糖苷键的形式共价连接，从而使糖链由磷酸多萜醇载体上转移至蛋白质上的过程。由于N-糖基转移酶只能识别特定的氨基酸基序Asn-X-Thr/Ser（X可以是除脯氨酸之外任何氨基酸）进行修饰，

LC-MS/MS蛋白质组学分析

LC-MS/MS蛋白质组学分析-详情"基于液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）的蛋白质组学可以揭示定量蛋白质组的状态，从而提供深入了解相关细胞或组织生物化学状态的机会。蛋白质并不是孤立的分子而是具有三维结构的物质，并且协同其他蛋白质分子一起参与调控各种生命活动，它们的空间结构和模块构成与其表达水平同样重要。基于LC-MS/MS的蛋白质组学方法结合生物化学手段，对于研究蛋白质组的结构单位有很大帮助作用。目前，随着高校液相色谱

N-糖样品制备和分析

N-糖样品制备和分析-详情"在开始基于质谱的N-糖检测之前，需要进行N-糖样品制备和分析，主要包括糖蛋白富集、N-糖释放与标记、N-糖衍生化等内容。糖蛋白富集：由于正常生理情况下糖基化蛋白的丰度较低，因此需要对N-糖基化修饰蛋白（即糖蛋白）进行富集，富集方法主要包括凝集素富集、硼酸亲和富集、亲水色谱HILIC富集和肼化学富集等。其中HILIC富集应用比较多，HILIC富集采用jí性固定相和非jí性流动相的色谱技术，利用糖肽和糖

蛋白质组学LC-MS

蛋白质组学LC-MS-详情"蛋白质组学是指大规模地对蛋白质的表达水平、翻译后修饰、蛋白质相互作用等进行研究。蛋白质组研究不仅可以全景式地揭示生命活动的分子本质，还能阐明生命在生理或病理条件下的变化机制。近年来，色谱和质谱技术的进步驱动了蛋白质组学的快速增长，逐步实现了“深度覆盖”。液相色谱串联质谱（LC-MS）是蛋白质组学研究中zuì常用到的技术，随着高效液相色谱技术（HPLC）和质谱（MS）技术的发展，基于LC-MS的

N糖检测

N糖检测-详情"N糖对糖蛋白的结构和功能具有重要作用，N糖检测是解析N-糖基化过程及糖蛋白功能的重要前提之一。由于糖蛋白释放的N糖数量有限，N糖分析一直非常具有挑战性，质谱法由于其高灵敏度和选择性而成为N糖检测分析的重要工具。目前，可使用基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）和液相色谱质谱联用（LC-MS/MS）对N糖结构进行解析，其可用于分析简单或复杂基质中N糖。N糖检测流程：在进行质谱检测之前，需要对样

蛋白LC-MS分析

蛋白LC-MS分析-详情"目前运用较广泛的识别和量化复杂蛋白质样品的技术通常是液相色谱（LC）和质谱（MS）技术，液相色谱-质谱联用仪（LC-MS）结合了LC的物理分离能力和MS的质量分析能力，用于样品中蛋白定性定量分析。其中LC技术将多种组分分离，具有高分子特异性和检测灵敏度的MS技术则负责检测分析各组分的结构特征，两种技术联用得到了协同增强。与传统的蛋白鉴定技术相比，LC-MS分析技术具有高通量、快速、灵敏、准确，以及自动

蛋白LC-MS/MS

蛋白LC-MS/MS-详情"液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）就是将色谱的分离能力与质谱的定性功能结合起来，实现对复杂混合物进行更准确的定量和定性分析。通常情况下，同一细胞/组织的蛋白样品，在不同时间/不同环境条件下蛋白谱的表达也存在不同，可通过蛋白LC-MS/MS分析对其进行表征和详细分析。蛋白LC-MS/MS分析是将蛋白用蛋白酶酶切消化为肽段混合物，这些肽段经高效液相色谱分离，再由串联质谱进行分析鉴定。蛋白LC-MS/MS鉴定步骤：收

N糖修饰发生修饰的位点

N糖修饰发生修饰的位点-详情"N-糖基化修饰发生在肽链的天冬酰胺（Asn）上，是zuì常见的糖基化修饰类型。N-糖结构是由14个单糖的前体链加到Asn残基上形成的，N糖修饰发生修饰的位点是肽链与糖链的结合位点。N-糖基化修饰具有位点特异性，其发生的位点一般在-Asn-X-Ser/Thr或-Asn-X-Cys（稀有）序列上，其中X为除脯氨酸以外的其他任何氨基酸，并且位于CH2结构域的五糖核心区域。相应的，N-糖基转移酶只能特异性识别特定氨基酸基序列

蛋白质谱图鉴定

蛋白质谱图鉴定-详情"蛋白质质谱分析中，样本蛋白经过蛋白酶水解后成肽段，经过一维或者多维的色谱法分离，之后肽段被电离和被碎裂形成特征串联质谱谱图，利用自动数据比对程序，将质谱谱图转变成肽段序列。然后对肽段组装和拼接进行验证，将错误的肽段信息滤除，已经被鉴定的肽段序列用来推断样本中有哪些蛋白，当然一些肽段序列可能出现在不止一个蛋白中，这也会使推断过程更加复杂。在常规的蛋白质谱实验中，蛋白质谱图鉴定可通

N-糖结构

N-糖结构-详情"糖蛋白是由14个单糖（Glc-3-Man-9-GlcNAc-2）的糖链末端N-乙酰基葡糖胺（GlcNAc）与蛋白质上天冬酰胺（Asn）的酰胺基团以N-糖苷键的形式共价连形成的。共价连接的序列位于CH2结构域的五糖核心区（Fc区）。N-糖的核心结构是五糖核心结构，五糖核心结构聚糖分子是由3个甘露糖（Man）和2个N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）所构成，其具有复杂的“双触角型”五糖分子结构。不同的聚糖分子可构成不同的糖型，且糖链长度、分叉方式

蛋白质质谱鉴定的基本原理

蛋白质质谱鉴定的基本原理-详情"蛋白质是一条或者多条肽链以特殊方式组合而成的生物大分子，大多数蛋白质会自然折叠为一个特定的三维结构。蛋白质鉴定主要就是识别蛋白质的一级结构，即鉴定蛋白质肽链氨基酸的排列、分子量，以及二硫键数目和位置。蛋白质鉴定是蛋白质组学的基础，且对生物研究具有重大研究意义。传统的蛋白质鉴定方法包括蛋白质微量测序和氨基酸组成分析（比如Edman降解法），具有低通量、耗时费力、非自动化、灵

糖蛋白结构分析

糖蛋白结构分析-详情"糖基化修饰是糖链在糖基转移酶的催化下，与蛋白质侧链氨基酸以糖苷键的形式共价连接，zuì终形成糖蛋白的过程。研究表明，超过50%的真核生物蛋白在经过糖基化修饰后，zuì终以糖蛋白的形式参与生命活动而发挥其作用。解析糖蛋白结构是理解其生理功能的一个重要前提。基于质谱的糖蛋白结构分析可使用液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）或亲水作用色谱串联质谱（HILIC-MS/MS）技术来开展。其基本流程为：shǒu先，使

糖蛋白糖基化检测

糖蛋白糖基化检测-详情"糖基化是蛋白质翻译后修饰的重要形式之一，生物体中糖链共价结合蛋白质中特殊基团合成糖蛋白。经过糖基化修饰的糖蛋白在细胞识别、细胞间信号传递、细胞迁移中均具有重要作用，糖蛋白糖基化检测是研究生物体生命活动的一个重要方法。目前，糖蛋白糖基化检测通常使用糖蛋白亲和力检测方法、荧光探针方法以及质谱法，随着质谱分辨率的不断提高，基于质谱的糖基化检测技术已得到广泛的应用。在开始质谱检测之前

蛋白质质谱分析流程

蛋白质质谱分析流程-详情"目前，酶解、液相色谱分离、串联质谱及计算机算法的联合应用已成为鉴定蛋白质的趋势，通过质谱鉴定氨基酸序列来匹配相应的蛋白质可对蛋白质进行定性研究，是蛋白质组学研究的基础。目前，蛋白质质谱主要测定蛋白质一级结构，包括分子量、肽链氨基酸排序及二硫键数目和位置，其分析流程如下所述。通过实验准备所需的样本细胞，再经过分离提纯得到蛋白质样本，包括单一蛋白质（纯化蛋白、2-DE/DIGE凝胶胶点

糖蛋白检测

糖蛋白检测-详情"糖蛋白是蛋白质糖基化修饰作用后产生的一种蛋白质类型，生物体内约50%的蛋白质以糖蛋白的形式发挥其生物学功能。通过糖蛋白检测可对蛋白质糖基化修饰过程进行研究，糖蛋白检测包括糖基化修饰的定性定量分析、糖基化修饰位点分析等。一般可使用液相色谱质谱联用（LC-MS）或亲水作用色谱串联质谱（HILIC-MS/MS）技术对特定修饰的糖蛋白进行检测，包括特定修饰糖蛋白的鉴定、糖基化结合位点鉴定等内容。糖蛋白检测思

蛋白质质谱分析

蛋白质质谱分析-详情"蛋白质是一条或多条肽链以特殊方式组合成的生物大分子，其复杂结构主要包括一级、二级、三级或四级结构。目前蛋白质质谱测定主要是针对蛋白质一级结构包括分子量、肽链氨基酸排列及二硫键数目和位置。自从确认生物大分子结构的生物质谱方法出现以来，质谱分析已成为研究生物大分子特别是蛋白质研究的主要支撑技术之一。用于质谱分析蛋白质的方法主要有三种：肽质量指纹图谱法（PMF）、串联质谱法（CID）和梯形

怎样检测蛋白质糖型

怎样检测蛋白质糖型-详情"蛋白质糖基化是一种广泛且重要的翻译后修饰，蛋白质经糖基化修饰合成糖蛋白，糖蛋白上所结合的糖链种类和结构称之为糖型，糖基化修饰糖型主要可分为N-糖和O-糖。糖型的检测与鉴定是理解糖链、糖蛋白功能以及糖基化修饰过程的前提之一。怎样检测蛋白质糖型？通常可选择液相色谱质谱联用（LC-MS）技术或基质辅助激光解吸-飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）技术对蛋白质糖型进行鉴定及相对定量分析。蛋白质糖型检

蛋白质谱经常混有角蛋白吗

蛋白质谱经常混有角蛋白吗-详情"角蛋白是纤维结构蛋白家族之一，它是构成毛发、羽毛、蹄甲、角、蚕丝、皮肤等的主要成分。因此，在进行蛋白质质谱鉴定实验中角蛋白有很大可能性是做实验时不小心混入而成为污染蛋白。当然也不排除样品中原本就含有角蛋白的可能。蛋白质谱经常混有角蛋白吗？答案是不一定。特别是在复杂样品或溶液中蛋白质的纯化、富集、蛋白酶酶解等通过人体操作的实验过程中，样品与人体手上皮肤的直接接触（实验防

糖蛋白质组学

糖蛋白质组学-详情"糖基化（Glycosylation）是一种普遍且重要的蛋白质翻译后修饰，它是由糖链在糖基转移酶催化下和蛋白质上特殊的氨基酸残基形成糖苷键的过程。蛋白质经过糖基化修饰作用形成糖蛋白，生物体内约50%的蛋白质以糖蛋白的形式发挥作用。糖基化修饰是生命体中非常重要的翻译后修饰，随着蛋白质组学技术的发展，不同复杂生物体系中的糖蛋白质组学得到了越来越深入的研究。糖蛋白质组学（Glycoproteomics）是指大规模分离