多肽质谱
多肽质谱-详情"多肽质谱就是利用质谱技术对多肽进行鉴定分析。多肽质谱分析的原理与蛋白质一样,都是通过串联质谱进行定性或定量鉴定。经色谱分离的多肽分子通过离子源进行离子化后,利用质谱仪进行一级和二级质谱检测,根据MS1和MS2数据,如多肽离子质荷比、质谱图等结合生物信息学分析,获取多肽的氨基酸序列信息或翻译后修饰信息,以实现多肽的鉴定和表征。百泰派克生物科技使用Thermo公司zuì新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱
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2023-09-11 09:30
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shotgun策略蛋白质分析
shotgun策略蛋白质分析-详情"Shotgun鸟枪法蛋白质组学分析是指利用高效液相色谱和质谱联用技术,使用自下而上的蛋白质组学策略鉴定复杂混合物中的蛋白质。鸟枪法蛋白质组学zuì常见分析策略是先酶解消化混合物中的蛋白质,然后用液相色谱(LC)法分离酶解产生的多肽,被分离的肽段在质谱仪中解离成带电荷的离子,通过串联质谱分析获得相应的质谱数据,利用生物信息学软件结合相应蛋白质数据库质谱数据进行分析,从而实现蛋白质的定
蛋白质复合物,蛋白质与小分子复合物分子量测定
蛋白质复合物,蛋白质与小分子复合物分子量测定-详情"质谱法鉴定蛋白质分子量对样品的消耗很少,且具有更高的灵敏度、分辨率和准确度,有利于对复杂混合物样品的分析。目前广泛用于蛋白质鉴定的质谱分析主要有两种类型的质谱:一种是MALDI-TOF直接对分子量进行测量,MALDI离子源产生的离子多带单电荷,质谱图中的峰与样品各组分质量数是一一对应的,不用额外去卷积即可根据质谱图计算得出样品的分子量;另一种是使用ESI-MS高分辨率
多肽链氨基酸序列分析
多肽链氨基酸序列分析-详情"多肽是指由三个及以上氨基酸脱水缩合形成的小分子化合物,多肽与蛋白质之间没有明显界限,一般将氨基酸数量小于50或分子质量小于30kDa的称为多肽。蛋白质进行序列分析需要先将其酶解成多肽片段再进行后续操作,因此多肽氨基酸序列分析的方法和原理与蛋白质大同小异,蛋白质测序方法同样适用于多肽,如N端测序、C端测序、从头测序、肽质量图谱测序和基于质谱的序列分析等。百泰派克生物科技使用Thermo公
shotgun和TMT
shotgun和TMT-详情"Shotgun鸟枪法蛋白质组学是一种自下而上的蛋白质组学分析策略,这种分析策略将完整蛋白质酶解消化为小分子肽段,通过液相色谱进行分离后进行串联质谱分析,根据质谱数据信息如肽段母离子的质荷比(m/z)等结合生物信息学软件进行数据分析,以实现蛋白/多肽序列以及含量分析等。TMT串联质量标签是一种典型的Shotgun基于鸟枪法的蛋白质标记定量技术。同位素标记包括用合成的含有轻或重同位素的试剂化学修饰靶肽,
分泌蛋白的组学检测
分泌蛋白的组学检测-详情"蛋白质是生物体细胞功能的直接执行者,也是保证生命过程正常进行的重要物质。蛋白质在核糖体上合成,经内质网和高尔基体进行加工,成为成熟的、有生物学功能的活性蛋白。蛋白质都是在细胞内合成,但是细胞外也有各种蛋白质,执行不同的生物学功能。所以,蛋白质在细胞内合成后,会被转运到不同的部位发挥其特定的作用。分泌蛋白就是在细胞内合成后,分泌到胞外起作用的蛋白质,如各种消化酶、激素、淋巴因
SILAC技术和免疫共沉淀法结合质谱联用技术
SILAC技术和免疫共沉淀法结合质谱联用技术-详情"免疫共沉淀(Co-IP)是基于免疫学原理研究蛋白质相互作用的经典方法,通过使用靶蛋白特异性抗体来间接捕获与特定靶蛋白结合的蛋白,从而识别生理相关的蛋白-蛋白相互作用,并可通过质谱技术来鉴定新的相互作用蛋白质。SILAC(Stable isotope labeling using amino acids in cell culture)细胞培养条件下稳定同位素标记技术是一种基于同位素标记的蛋白定量技术。SILAC方法使用体内新
高通量测序
高通量测序-详情"高通量测序技术,又称为二代测序技术(Next Generation Sequencing, NGS)是在一代测序技术上发展而来的新一代测序技术。高通量测序技术克服了一代测序技术通量低、成本高的缺点,使同时分析几十万到几百万条序列成为现实,在大幅度提高通量的同时,保证了测序结果的准确性,降低了测序成本。高通量测序技术的问世使得我们能快速、细致、全面、深入的分析一个物种的基因组和转录组序列,揭开这些遗传物质的神秘面
SILAC最多可以标记多少样品
SILAC最多可以标记多少样品-详情"SILAC(Stable isotope labeling using amino acids in cell culture)细胞培养条件下稳定同位素标记技术是一种基于质谱的标记定量蛋白质组学方法,使用非放射性同位素标记来检测样品中蛋白质丰度的差异。SILAC通过正常的代谢过程标记细胞蛋白质组,利用含同位素标记的氨基酸培养基培养细胞,通过细胞正常的新陈代谢使所有新合成的蛋白质带上非放射性、稳定的含同位素的氨基酸,zuì后利用液相色谱
iTRAQ
iTRAQ-详情"iTRAQ(isobaric tags for relative and absolute quantitation)即同位素标记相对和绝对定量技术,是由AB SCIEX公司研发的一种基于标签的蛋白质定量技术。iTRAQ技术通过同位素标记来实现蛋白质定量研究,其基本原理为:将水解得到的蛋白质多肽N末端或赖氨酸侧链基团用同位素试剂标签标记,再将该混合物进行高精度串联质谱分析,根据信号峰强度等质谱信息实现对样品蛋白的定量和定性分析。iTRAQ含有8种不同的试剂标签,
SRM、MRM与PRM的区别
SRM、MRM与PRM的区别-详情"MRM(Multiple Reaction Monitoring)多重反应监测也称SRM(selected reaction monitoring)选定反应监测,与PRM(Parallel Reaction Monitoring)平行反应监测技术是靶向定量蛋白质组学研究中两种不同的质谱数据采集模式,PRM是在MRM/SRM的基础上发展而来的,两者主要存在以下几点不同之处:(1)MRM/SRM一次监测每个前体离子/产物离子的转变,而PRM以高分辨率和高质量精度分
swath-ms
swath-ms-详情"SWATH-MS是一个新兴的用于非标记定量的蛋白质组学平台,该平台基于数据非依赖型采集(DIA)原理,用于同时进行蛋白质鉴定和定量。不同于传统的基于数据依赖型模式的质谱技术如Shotgun和SRM等,SWATH-MS从某种意义上说完整地记录了蛋白样品中任何可检测的前体离子的所有碎片信息,集Shotgun(高通量)和SRM(高准确性和重复性)的优点于一身,正在成为一种将深度蛋白质组覆盖能力与定量一致性和准确性相结合的技术。S
非定量蛋白质组学
非定量蛋白质组学-详情"定量蛋白组学技术根据是否使用标签标记分为标记和非标记两种策略,即标记定量蛋白质组学和非标记定量蛋白质组学。目前还没有非定量蛋白质组学这一说法,可能刚入门的蛋白质组学研究者对这些专业术语不够了解,误把非标记定量蛋白质组学当成非定量蛋白质组学。非标记定量蛋白质组学技术又称为Label Free蛋白质定量技术,其一般的分析流程为将未标记的蛋白样品进行酶解、消化为小分子肽段,再利用串联质谱技术
wb蛋白定量
wb蛋白定量-详情"蛋白质印迹(Western blotting,WB)是细胞和分子生物学中的一项重要技术。通过使用蛋白质印迹,研究人员能够从细胞中提取的复杂蛋白质混合物中鉴定出特定的蛋白质。该技术使用通过三个步骤来完成这一任务:(1)按大小进行蛋白分离,(2)将蛋白转移到固体支持物上,(3)使用合适的一级和二级抗体标记靶蛋白进行可视化。WB通常用于分离和鉴定蛋白质的研究,也可用于蛋白含量的鉴定。在这种技术中,根据蛋白质分
谷氨酸蛋白酶 蛋白质质谱分析
谷氨酸蛋白酶 蛋白质质谱分析-详情"蛋白质质谱分析技术可用于蛋白质定性和定量鉴定、蛋白质序列分析以及蛋白质结构预测等。质谱仪只能对离子化形式的物质进行检测,在进行蛋白质质谱分析前,需要将蛋白质酶解为小分子肽段,再利用离子源电离为肽段离子,zuì后利用质谱仪进行检测,所以蛋白酶解是样品制备的关键步骤。蛋白质质谱分析中常用的蛋白水解酶主要有胰蛋白酶(Trypsin)、谷氨酸蛋白酶(Glu-C)、糜蛋白酶(Chymotrypsin
wb检测蛋白互作
wb检测蛋白互作-详情蛋白质控制着细胞中的所有生物系统,虽然许多蛋白质独立地执行它们的功能,但是jué大多数蛋白质通过与其他蛋白质相互作用来执行各种各样的生物活动。因此,研究蛋白质相互作用对于理解蛋白质功能和细胞生物学至关重要。目前,常用的蛋白质相互作用研究技术主要包括免疫共沉淀(Co-IP)、(GST)Pull-down、交联法、标记转移法、蛋白印迹(Western Blot)以及Far-Western Blot等。蛋白印迹(Western Blot,WB)
SILAC
SILAC-详情SILAC(Stable Isotope Labeling By Amino Acids In Cell Culture)是Thermo Fisher公司研发的一种体内标记蛋白质定量技术,即细胞培养中氨基酸的稳定同位素标记。该技术的基本原理是利用轻型、中型或重型同位素标记的必需氨基酸(如Lys、Arg等)进行细胞培养,使新合成的蛋白质带上同位素标记,提取经不同处理条件后的细胞蛋白并等量混合,通过凝胶或色谱分离、酶解消化后进行串联质谱分析,根据一级质谱和二级质谱数据
WB检测磷酸化蛋白
WB检测磷酸化蛋白-详情蛋白印迹(Western Blot,WB)是基于免疫学原理的一种蛋白质分析技术,常用于检测组织匀浆提取物中特定蛋白质的存在、大小、含量以及相互作用等。WB已广泛用于蛋白质-DNA相互作用、蛋白质-蛋白质相互作用以及蛋白质翻译后修饰等分析。WB同样可以检测特定样品中磷酸化蛋白的存在、含量以及大小等,只是需要选择能特异识别磷酸化蛋白的一抗。其基本原理是通过一级抗体识别并结合经电泳分离并转移到PV膜上的磷酸
互作蛋白组
互作蛋白组-详情蛋白质作为生物体细胞功能的执行者,并不全是“单枪匹马的作战”,一些蛋白需要与其他蛋白质相互结合形成复杂的蛋白复合体才能发挥特定的生物学功能,如血红蛋白、组蛋白等。由于蛋白质相互作用在生命过程中扮演的重要作用,互作蛋白组学应运而生。互作蛋白组学以相互作用的蛋白质组为研究对象,利用组学技术对相互作用的蛋白质进行定性和定量分析、寻找未知的相互作用蛋白,旨在揭示特定生物学过程的分子机制,把
western blot技术
western blot技术-详情蛋白印迹(Western Blot,WB)也称免疫印迹,是一种基于抗体的蛋白质分析技术。利用抗体-抗原的特异性相互作用可以在复杂的蛋白质混合物中识别感兴趣蛋白(目标蛋白质),以实现感兴趣蛋白的定性和半定量分析,在蛋白质表达水平、抗体活性、蛋白质相互作用以及蛋白质翻译后修饰分析中广泛应用。WB主要包括以下步骤:(1)样品分离:利用SDS-PAGE分离蛋白混合物;(2)转膜:将蛋白条带从凝胶转移到固相载体—
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