PMB Agarose Beads/Resin

一、产品特性

二、工作原理

    内毒素，即脂多糖，是革兰氏阴性细菌细胞壁的主要组成部分，广泛存在我们的试剂耗材和样品中。在利用革兰氏阴性菌生产的相关制品，内毒素的含量可达到几百万单位每毫克样品，包括大肠杆菌重组表达蛋白，是生物制品纯化中最头疼的杂质之一。内毒素是哺乳动物免疫系统极强的刺激源，极微量即可因此动物体发热甚至死亡，对动物细胞有很强的毒性，是生物试验和医药制品的头号污染源，严重影响了各种体内外试验。内毒素结构成分复杂，热稳定性和化学稳定性极强，常规方法很难除去。本产品利用亲和层析来去除内毒素。

三、常规操作

1.装柱，将凝胶介质轻轻混悬起来，取适量的凝胶（如10 mL）装填于无内毒素层析柱或离心柱中。

2.洗涤介质，用3~5倍柱体积的无内毒素水或缓冲液洗涤凝胶，洗去凝胶保存液（20% Ethanol）。

凡是遇到凝胶第一次使用、长时间停用、更换层析柱的情况，必须要按步骤8对凝胶介质进行再生处理。

3.平衡介质，用5~10倍柱体积的样品缓冲液（可以使用0.9% NaCl或pH 7.2，0.1 M PBS）平衡柱子。

4.上样，上样速度宜缓慢（如大肠杆菌表达重组蛋白10mg/mL，50,000 EU, 10 mL），建议流速小于2 mL/min。

5.收样，收集样品流穿液，用1倍柱体积的的无内毒素缓冲液（pH 7.2~7.8，盐离子浓度50mM~500mM）洗涤凝胶，建议流速为0.2 mL/min，收集洗脱液与流穿液合并，即为去内毒素的纯化样品。

6.样品保存，建议纯化好的高纯的蛋白样品立即冻干或是加50% Glycerol保存于-20℃以下，否则样品很容易聚集沉淀或是降解。

7.样品检测，纯化好的样品进行内毒素检测试验，内毒素应小于0.1 EU/mg 蛋白。如果内毒残留量过高，请将样品再上样1~2次，以去除更多的内毒素。

8.再生介质，用5~10倍柱体积的1% DOC（脱氧胆酸钠）洗涤凝胶介质，然后用10倍柱体积无内毒素水洗涤凝胶介质。

9.保存介质，用3~5倍柱体积20% Ethanol洗涤凝胶，将凝胶保存于20% Ethanol中。使用方法恰当，本介质至少可以再生使用10次。

四、注意事项

1.使用本公司产品前请详细阅读本产品说明书及相关文献报道，或咨询我公司技术服务人员。

2.本产品系Polymyxin B-Agarose即多粘菌素B亲和介质，吸附的靶分子是内毒素即脂多糖。若您的纯化产物是样品，想去除的是内毒素，请务必一定要收集好流穿液，即您纯化好的样品。

3.本产品所涉及到的参数均是在本公司模式蛋白质控下获得。请您在使用本产品前充分了解自己样品的特性。我们不能保证您的样品和操作方案一定可达到本说明中所提供的纯化效果。

4.由于内毒素本身结构含有脂链、蛋白、多糖，是十分复杂的生物大分子，它能够在缓冲液中通过疏水作用力等与您的目的分子结合在一起。因此在样品纯化过程中，去除内毒素的同时有可能照成您样品的损失，损失率与您目的分子和内毒素的结合强度相关，您目的分子和内毒素的结合强度与样品缓冲液的盐离子浓度、pH等相关。

5.为了获得更高的样品回收率和内毒素去除率，建议您将待处理的样品溶解在pH 7~8、盐离子浓度50mM~500mM缓冲液中，所含内毒素总量不大于介质最高载量的1/10，并根据自己的样品特性模式最适合的纯化工艺。

6.本产品只限用于科学研究领域，禁止用于人体治疗。