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抗体/抗体片段抗原产生特异性和高效结合性，在生化、治疗和诊断等领域发挥不可替代的作用。传统生产单克隆抗体的杂交瘤技术，由于其自身研发周期比较长，生产的成本相对较高，已经成为大规模、快速生产抗体/抗体片段的瓶颈。近年来，随着基因重组和生物工程技术的不断进步，高通量筛选和大规模生产抗体/抗体片段成为现实。
抗原结合片段 （Fab） 是抗体上与抗原结合的区域。 它包含每条重链和轻链的一个恒定区和一个可变区。 只有重链和轻链的可变区融合在一起形成单链可变片段（scFv），其大小只有Fab片段的一半，但保留了原有的特异性。另一种小抗体片段，单域抗体，又称域抗体、VHH、VNAR或sdAb，是一种由单个单体可变抗体结构域组成的抗体片段，缺少常规的轻链和重链的CH结构域。
泰克生物是一家专业的CRO服务提供商，能为我们的客户提供高质量的重组抗体表达服务，如scfv抗体片段、fab抗体片段、sdAb单域抗体、重链抗体等重组抗体构建和表达服务。另外，泰克生物目前在建的5000平米的GMP研究中心，能够为各类工业客户提供批量的重组抗体生产服务。
█ 抗体片段特性
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抗体类型 |
组分 |
分子量（kDa） |
化合价 |
半衰期（h） |
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Fab |
VH+CH1+VL+CL （轻重链利用二硫键连接） |
50-55 |
单体 |
12-20 |
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scFv |
VH+VL |
30 |
单体 |
2-4 |
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sdAb |
VHH |
15 |
单体 |
0.5 |
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Fc融合抗体 |
（抗体+CH2+CH3）*2 |
/ |
二聚体 |
/ |
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di-scFv |
scFv*2 |
60 |
二聚体 |
4-8 |
█ 抗体片段表达系统常用宿主
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表达系统 |
菌株/细胞 |
特点 |
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E.coli |
BL21（DE3） |
Ion-ompT，有效防止重组蛋白在胞内被水解 |
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Rosetta |
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哺乳动物细胞 |
CHO-S |
是实验室常用的细胞系，作为贴壁和悬浮培养生长良好，生产率高，是大规模培养和GMP程序的理想选择；可进行许多翻译后修饰以获得生物仿制药，显示出卓越的生物相容性和药物活性；适用于无蛋白、无动物生产、无血清培养条件，并具有更好的稳定性和安全性。 |
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CHO-K1 |
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Freestyle 293F |
是一类能够在无血清中高表达蛋白的野生型293细胞系，可以高效表达蛋白。 |
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Expi 293F |
具有高度可转染行，展示出较高的蛋白表达水平，相比标准的悬浮适应293细胞，表现出更快速的细胞生长和更高的培养存活率。 |
█ 抗体片段高表达策略
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优化方式 |
特性 |
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融合抗体 |
Fab 基因表达时，5'端带上细菌蛋白信号肽基因的Fd基因和L链基因，可在大肠杆菌细胞壁的周质腔内分泌型表达，形成完整的立体折叠。Fab片段保持了亲本抗体的抗原结合特异性和生物学活性。Fd基因片段和L链基因可以分别构建在两个载体上，然后共转染细胞，也可以构建在一个载体上转染细胞进行表达。 |
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抗体序列本身的修饰 |
经定点突变可以改变抗体在某些关键位点的氨基酸，从而优化其稳定性，增强与抗原的亲和性，提高表达产量。 |
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表达系统的选择 |
应考虑的因素有：实验设备、需表达抗体毒性、所需营养物、是否需要抗体高产率、抗体纯化工艺、生产成本、调控元件、生物安全方面等。 |
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密码子优化 |
天然抗体/scFv来源于真核生物,其密码子很可能不为E.coli所偏好，使用偏好密码子能提高细胞对环境及抗体的适应性,减少重组抗体的错误折叠率。 |
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条件优化 |
需要考虑的因素包括温度、培养基配比、pH、培养时间及诱导条件等。 |
█ 抗体表达服务内容
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实验内容 |
交付 |
周期 |
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基因合成＆载体构建 |
1. 重组抗体 2. 表达载体 3. 克隆菌株 4. 实验报告 |
6-8周 |
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质粒抽提 |
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细胞转染＆表达抗体 |
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抗体纯化（SDS-PAGE） |
█ 泰克可提供的服务
片段抗体构建和生产服务
片段抗体包括Fab抗体、scFv和VHH抗体（驼源纳米抗体）等。客户可直接提供Fab、scFv或VHH序列，交由泰克生物进行重组表达并获得高纯度产品。如客户仅有靶抗原信息，则可委托泰克生物进行动物免疫并筛选scFv、VHH等抗体。
重组抗体293F/CHO细胞表达服务
全套Gibco无血清哺乳细胞培养，适用于科学家对天然构象蛋白的体外重组表达需求，如糖基化修饰，磷酸化修饰等。为客户提供的全套服务满足GMP-like体系，包括细胞种子库来源文件记录体系、细胞种子批检定，动物源成分的质控，标准化细胞培养与转化操作流程，全套GE提供的纯化填料和设备等准则进行生产的重组蛋白。
█ 服务优势
✔ 详细的实验设计和论证：包含稀有密码子分析，抗体序列分析，表达系统的选择，表达载体构建方案，抗体修饰等
✔ 多种标记抗体表达：His标签融合表达，同位素标记表达、生物素标记表达
✔ 多个种属的重组抗体制备：包括人源，鼠源，兔源，羊源，犬源，骆驼源，羊驼源，牛源等
✔ 抗体修饰控制：糖基化修饰和磷酸化修饰多寡控制
✔ 多重表达模式：稳定表达和瞬时表达
✔ 配套的哺乳体系高表达载体和各种规格的放大体系
✔ 低内毒素水平：LAL检测法<0.1EU/ug
✔ 完整的文件追溯体系，保证您的产品所有材料、试剂和制备信息可追溯
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