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重组单克隆抗体是使用重组DNA 技术产生的抗体,具体是指通过DNA重组技术将抗体相应的基因序列根据需要进行改造和重组,并构建在质粒上,再通过蛋白外源表达技术将构建好的质粒转染/转化入适合的宿主细胞表达获得的抗体。重组抗体很好的解决了动物源抗体引起的人体排斥反应,使得抗体实现人源化,使抗体的效能更为完善。
泰克生物拥有完善的重组抗体表达生产平台,丰富的重组蛋白和重组抗体表达经验,能够为客户提供包括人源、鼠源、兔源、羊源、犬源、驼源、牛源等各种种属的重组IgG抗体表达服务,客户只需要提供抗体序列信息、杂交瘤细胞或cDNA,公司的技术支持可以根据客户的需求进行方案设计和表达体系优化,结合公司自主设计的哺乳体系高表达载体和大规模重组抗体发酵平台,为客户提供优质的重组抗体制备服务。
重组抗体的开发方法主要分为三类:1. 噬菌体展示技术:通过噬菌体展示技术可以从大容量的抗体多肽库中筛选到与特异性受体结合的高亲和力的多肽。与基因重组技术结合,可以将目的基因克隆出来,通过噬菌体展示技术对表达的抗体蛋白进行展示并筛选出特异性强、亲和力高的抗体。卡梅德生物可提供基于噬菌体展示技术的重组抗体生产,详情可与我们联系。2. B细胞克隆技术:通过动物免疫,分离获得浆细胞,经流式细胞术将其分离。扩增筛选出的细胞基因,将其克隆到载体中,使用ELISA筛选出表达较好的克隆,对其进行测序,从而在体外制备出重组抗体。3. 杂交瘤测序:对已制备出的杂交瘤进所获得的抗体进行基因测序,利用体外重组技术表达抗体。
█ 重组抗体的制备流程
█ IgG免疫效应
-- Fab段与抗原结合,发挥中和作用;
-- 补体依赖的细胞毒作用(CDC):Fc段激活补体,形成膜攻击复合物,能够溶解靶细胞;
-- 调理及吞噬作用(ADCP):Fc段可与中性粒细胞、巨噬细胞表面Fc受体结合,增强吞噬细胞吞噬作用;
-- 抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(ADCC):Fc段与自然杀伤细胞表面的Fc受体结合,介导自然杀伤细胞对靶细胞的杀伤。
█ 抗体种类
在人类血清中发现有五类抗体,相关情况如下所示:
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IgA |
IgD |
IgE |
IgG |
IgM |
重链 |
α |
δ |
ε |
γ |
μ |
位置 |
血管内和分泌物 |
B细胞表面 |
唾液和鼻腔分泌物中的嗜碱性细胞和肥大细胞 |
血管内和血管外 |
主要在血管内 |
作用 |
保护粘液膜 |
不明 |
防止寄生虫并与过敏反应有关 |
二级免疫反应 |
初级免疫反应 |
亚类 |
IgA1 IgA2 (2种) |
1 |
1 |
IgG1、IgG2、IgG3、IgG4 (4种) |
1 |
Fc区域结合至 |
骨髓细胞 |
B细胞 |
肥大细胞和嗜碱细胞 |
吞噬细胞 |
B、T和NK细胞 |
IgD、IgE和IgG通常以单体形式存在,而IgA通常以二聚体形式存在,IgM以五聚体形式存在。
█ 不同IgG亚型抗体
种属 |
IgG类型 |
人 |
IgG1/2/3/4 |
小鼠 |
IgG1/2a/2b/2c/3 |
大鼠 |
IgG1/2a/2b/2c |
兔 |
IgG |
犬 |
IgG |
泰克生物可提供以上各种种属及亚型的重组抗体制备服务。
█ 重组抗体制备的优势
-- 可对抗体的结构进行一系列改造与优化(包括人源化引入、人类IgG1类别的Fc区域等)从而提高抗体的亲和力和稳定性。
-- 抗原选择更加广泛,不受来源、纯度和量的限制。
-- 无需免疫动物,减少了动物实验的数量和伦理问题。
-- 所得抗体的特异性和亲和力都更强,可用于治疗和检测等领域。
█ 重组抗体制备的服务内容
流程 |
服务内容 |
交付 |
基因合成和密码子优化 |
客户可提供抗体/氨基酸序列或包含抗体基因的重组质粒 |
1. 纯化抗体 2. 表达质粒 3. 质检报告 |
载体构建 |
克隆至泰克生物高效表达载体中;抽提质粒 |
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表达纯化 |
瞬时转染HEK293/CHO细胞; 纯化抗体 |
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质检分析 |
SDS-PAGE;UV;内毒素分析、ELISA等(可选) |
█ 服务优势
✔ 已成功表达过多物种来源(人、鼠、兔等)的全长和scFv、Fab、VHH、嵌合抗体、双特异性抗体、Fc融合抗体。
✔ 哺乳动物细胞表达平台:自主设计的高表达载体、优化的自主产权培养基和专有的转染试剂。
✔ 多个规格放大表达体系满足不同客户需求量。
✔ 拥有专业的技术团队,可定制个性化一对一抗体发现整体解决方案。