KP-N-NS人肾上腺神经母细胞瘤细胞(脑转移)

细胞名称：KP-N-NS人肾上腺神经母细胞瘤细胞(脑转移)

描述：源自脑转移灶的肾上腺神经母细胞瘤。

动物种别：人

性别：

组织来源：肾上腺，脑转移

形态：其他

培养基和添加剂：RPMI-1640(GIBCO,货号31800022,添加NaHCO3 1.5g/L,glucose 2.5g/L,Sodium Pyruvate 0.11g/L)，90%；胎牛血清，10%。气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度。

供应限制：A。仅供研究之用。

REFERENCE：Yoshihara,T.,Ikushima,S.,Hibi,S.,Misawa,S.,Imasuku,S.,Hum Cell,6,210-217,1993 PubMed ID:8297818

KP-N-NS人肾上腺神经母细胞瘤细胞(脑转移)传代操作步骤：

一、贴壁细胞传代

1.提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热，用75%酒精擦拭后再放入超净台内。

2.吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液，加少量PBS润洗细胞。

3.加入适量胰酶，使胰酶的量能盖住细胞，37℃孵育，每隔2~3min显微镜下观察，待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶，加入新鲜培养基，晃动细胞瓶，终止胰酶作用。

4.KP-N-NS人肾上腺神经母细胞瘤细胞(脑转移)用吸管小心吹打贴壁的细胞，制成细胞悬液。控制吹打的力度，避免产生大量的气泡。

5.将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养，隔天观察贴壁生长情况。

二、悬浮细胞传代

1.将细胞悬液转移到无菌离心管内，1000rpm离心5min。

2.弃去上清，加入新鲜的培养基，用吸管小心吹散沉淀，制成细胞悬液。

3.将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养。

KP-N-NS人肾上腺神经母细胞瘤细胞(脑转移)培养的过程中，经常见到黑色的颗粒或小黑点，这种情况是怎么引起的呢？该怎么避免呢？原因：

黑点，大概有细胞本身带的，环境有的，还有人身上带进细胞间的,还有就是血清和培养基

1、如果小黑点有增殖趋势，那么就有可能是污染了，需要处理；

2、如果小黑点没有增殖趋势，且不影响细胞生长，也不影响实验的话，则可能

a、是“黑胶虫”，黑胶虫究竟是一种生物还是非生物，本身就存在争议。有人认为是从血清中来的一种原虫，也有人认为是细菌，或是真菌，也有人认为是血清中的蛋白的结晶。“黑胶虫”可寄生于动物细胞，也可以生存于培养基中，依靠KP-N-NS人肾上腺神经母细胞瘤细胞(脑转移)和培养基中的营养为生，并随细胞传代而传代。“黑胶虫”与细胞竞争性生长，开始时对细胞并没有什么影响，但当黑胶虫的数量多到一定程度的时候，细胞生长就会受到影响直至死亡，严重影响了科研活动的开展和进行。以前（这个至少是10年以前），很多实验室在养细胞时用国产血清，那时的血清可能质量不过关，有所谓的“黑胶虫”，但是也没有明确的鉴定。但是现在的血清，即使国产的，产品里这种现象就少见了。

b、是细胞碎片，或血清里德沉淀析出，在做布朗运动。

c、是核糖体，也可能是杂质形态：贴壁，悬浮均有；上皮细胞样.

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