RH-35大鼠肝癌细胞zl-056540质粒载体网

　　一、RH-35细胞详情

RH-35细胞源自由N-2feuorenyldiuctamid在雄性AxC大鼠中诱导的可移植ReulierH-35肝癌。RH-35细胞较小，提供者称饥饿24小时可以使其同步。

种属大鼠

年龄（性别）雄

组织来源肝癌

生长特性贴壁

细胞形态上皮细胞样

生长培养基DMEM高糖＋10%FBS＋1%P/S

培养条件气相：空气，95%；CO2，5%温度：37℃

二、细胞接收后的处理：

1、贴壁细胞

收到T25方瓶细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们（冻存管细胞收到后直接37℃水浴复苏或直接放置于液氮中长期储存）。

请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。

弃去T25瓶中的培养基，换用新鲜的*培养基。

如果细胞长满（90%以上）请及时进行细胞传代。

接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。

2、悬浮细胞

收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。

请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将15ml离心管置于37℃培养约2-3h。

1200rpm离心5min，弃去15ml离心管中的培养基，细胞沉淀用新鲜的*培养基重悬并培养。

如果细胞长满（90%以上）请及时进行细胞传代。

接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。

本公司的细胞培养操作规程，供参考

一、RH-35细胞培养基及培养冻存条件准备：

准备H-DMEM培养基，90%；优质胎牛血清，10%。

培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。

二、细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化2-3分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3ml此细胞的培养基终止消化。

轻轻吹打后吸出，移入15ml离心管中，在1200RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，加入1mL培养液后吹匀。

移入到事先准备好的含有5ml培养基的T-25培养瓶中或含有14ml培养基的T-75培养瓶中培养。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，先要消化处理并进行细胞计数。消化方法按照细胞传代方法的1-3步骤进行，后的重悬液使用血清。悬浮细胞直接计数后离心，用血清重悬浮，加DMSO至终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。

注意事项：

1.收到冻存管细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

2.所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

3.细胞用途：仅供科研使用。

智立中特（武汉）生物科技有限公司主要致力于质粒微生物资源的保护、共享和持续利用，围绕我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展等重大需求，探索、发现、收集国内外的微生物资源，妥善长期保存管理；在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供质粒载体物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。旗下质粒载体网是一款提供质粒载体展示及定制的专业型网站，由智立中特（武汉）生物科技有限公司联合多家企业公司科研院校共同打造！主要展示了各种基因类型下的质粒载体！