     |
用于蛋白质水解的内切蛋白酶中，丝氨酸蛋白酶胰蛋白酶是zuì常见的一种，因为它能产生高度适用于MS（MS/MS）分析的肽。根据蛋白组学分析流程，蛋白质的酶解可以在凝胶内或在溶液中进行。胶内水解是二维电泳分离蛋白质的常规方法，而LC-MS/MS分析中通常使用溶液内水解法。在水解过程中，将蛋白质酶切成一定数量的较短的片段或肽段，以根据其特有的质量和模式来鉴定蛋白质。
蛋白质胶内水解/溶液内水解
胶内水解
1D或2D凝胶电泳分离的样品+超链接：编号1，使用MS兼容的染色剂，通常为考马斯亮蓝，或不含戊二醛的银染蛋白质。从凝胶上切下对应的蛋白条带后，对胶样进行脱色、脱水后，再使用胰蛋白酶对胶带或胶点进行水解。
凝胶经乙腈处理脱水后，在含有蛋白酶的消化缓冲液中溶胀，有助于酶渗透到凝胶中。对酶渗透凝胶的各项研究表明，这个过程几乎完全是由扩散驱动的，通过将凝胶切成尽可能小的碎片，可以提高凝胶内消化的效率。
表面活性剂(去污剂)有助于蛋白质在凝胶中的溶解和变性，从而缩短消化时间，增加蛋白质裂解以及提取肽的数量，特别是对亲脂性蛋白质，如膜蛋白，在酸性条件下将可裂解的洗涤剂裂解，从而使添加的去污剂与质谱兼容。
为了保证凝胶基质中蛋白质的高效水解，一般使用较高的酶浓度。如将浓度为50％乙腈（ACN）/ 5％甲酸（FA）用作提取缓冲液，结合超声处理，从凝胶基质中释放生成的蛋白水解肽。为了满足具有不同物理和化学性质的肽的要求，可使用碱性或酸性溶液进行迭代萃取。
胶内水解和肽提取效率取决于多种因素，包括：1.蛋白质和所得肽的物理化学性质，如疏水度、分子量大小和氨基酸序列；2.凝胶块的组成、大小和厚度；3.提取缓冲液的组成，如乙腈（ACN）的浓度；4.酶的类型及其比活性；5.一般反应条件(如温度、时间、酶底物比)；6. 蛋白染色的种类(例如，Coomassie或silver)。
胶内蛋白质水解的一个显着优点是所有污染物在电泳过程中就已经被出去，包括去污剂、盐等，因此可以很容易地对产生的多肽样品进行后续质谱分析。但是，由于：1.蛋白酶对蛋白质的可及性差；2.肽从凝胶基质中释放的效率低；3.凝胶的储存不充分等原因，该方法的有效性可能受到限制。蛋白质直接在溶液中进行消化，是作为凝胶电泳+凝胶内消化的一种很好的替代方法，通常在此基础上进行一维或二维的色谱分离，从而在质谱分析前有效地分离得到的肽混合物。
溶液内水解
溶液内水解时，必须折中处理蛋白质溶解度和酶活性之间的关系。在蛋白质潜在的胱氨酸或半胱氨酸的还原和烷基化（r＆a）过程中，二硫键发生不可逆地断裂，从而获得zuì佳的三级结构展开。这种化学修饰使具有大量二硫键的蛋白质被成功鉴定，并获得zuì高的肽产量和序列覆盖率。对于变性电泳，强烈建议在进行电泳之前进行反应，因为凝胶中存在能够修饰半胱氨酸的游离丙烯酰胺单体。
一般应避免使用洗涤剂，但根据蛋白酶解物的物理化学特性，可以使用有机溶剂和/或复合溶剂。对于难以溶解或变性的蛋白质，如膜蛋白质，可以将8M尿素与富有弹性的蛋白酶Lys-C结合使用；随后，以较低浓度的离液剂（2M尿素）进行胰蛋白酶水解。在使用FA进行酸化后，可以直接进行质谱分析（通常建议进行额外的脱盐步骤后上机）。有机溶剂作为尿素中双重蛋白水解的可能性替代方法，可用于溶液中疏水蛋白的溶解和有效消化。为了增强蛋白水解程度，可以使用化学固定或物理吸附到固定相的酶。
| 点击立即咨询>> | 点击提交需求>> |
| 科研服务电话：182-4221-8588 | 访问品牌官网>> |
基于生物化学、分子生物学、色谱的检测分析平台：该平台配备了Agilent 2100 生物分析仪、 ProteinSimple凝胶成像系统、高效液相色谱系统，为蛋白质组学、代谢组学分析保驾护航，包括样品制备、分离纯化、分子量测量、杂质表征表达研究等；
基于质谱技术的蛋白质组学分析平台、代谢组学分析平台、蛋白测序平台：该平台配备了超高效液相色谱质谱联用，Orbitrap Fusion Lumos Tribri，Thermo Scientific Exploris以及氢氘交换质谱仪配合机械臂为蛋白质组学、代谢组学和蛋白测序提供了全面的分析手段，包括蛋白质和代谢物的分离、质谱分析、结构分析以及动态信息研究；
生物药物表征平台： 该平台配备了DSC-FTRR差示扫描量热仪与傅立叶变换拉曼光谱仪，氢氘交换质谱仪配备机械臂，为生物药物表征提供了全面的分析手段，包括生物药物的分离、纯化、结构分析和动态信息研究；
基于10x Genomics的单细胞分析平台：该平台能够完成基于10x Genomics单细胞分析平台的检测流程，包括单细胞分选、cDNA合成、文库制备、文库质量检测、PCR扩增以及高通量测序；
基于Fluidigm的单细胞质谱流式检测平台：采用基于Fluidigm Helios流式细胞仪（Mass Cytometry System for Single Cell Analysis）用于单细胞质谱分析，该平台能够完成包括单细胞捕获、cDNA合成、实时定量PCR分析、目标区域扩增以及质谱流式细胞分析；
基于高精度质谱的免疫多肽组学及免疫学检测平台：基于高精度质谱的免疫多肽组学及免疫学检测平台，能够完成包括多肽分离、纯化、合成、质谱分析、免疫学检测以及分子相互作用研究；
生信云平台：基于生物信息分析方法的生信云平台，能够完成一整套的生物信息学解决方案，包括组学数据的质量分析、差异表达分析、差异表达物GO、KEGG、COG注释分析、聚类分析、相互作用网络等多层次网络和通路的分析。
一、蛋白测序
蛋白测序服务两种主要分析方法
E蛋白测序服务两种主要分析方法：Edman降解（Harvey和Ferrier，2011； Bauer等，1997）和质谱分析（MS）（Sahukar等，2016）。蛋白质测序和鉴定常用质谱法，Edman降解法是表征蛋白质N端重要的方法之一。
百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司Edman降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于Edman降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。
蛋白测序服务流程
蛋白测序服务优势
1 .采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;
2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;
3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;
4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;
5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;
6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。
二、蛋白质组学
蛋白质组的研究不仅能为生命活动规律提供物质基础，也能为众多种疾病机理的阐明及攻克提供理论根据和解决途径。通过对正常个体及病理个体间的蛋白质组比较分析，我们可以找到某些“疾病特异性的蛋白质分子”，它们可成为新药物设计的分子靶点，或者也会为疾病的早期诊断提供分子标志。确实，那些世界范围内销路好的药物本身是蛋白质或其作用靶点为某种蛋白质分子。因此，蛋白质组学研究不仅是探索生命奥秘的必须工作，也能为人类健康事业带来巨大的利益。蛋白质组学的研究是生命科学进入后基因时代的特征。
百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。
不同技术的比较
|
蛋白质组学服务 |
特点 |
技术要点 |
|---|---|---|
|
Label-free |
非标蛋白质组学 |
无需对样品标记处理； 操作简单； 可大规模分析蛋白质鉴定样品，对样品数量无限制。 |
|
iTRAQ/TMT |
体外标记定量蛋白质组学 |
可同时定量分析 2-10 个样品； 体外标记，不受样品类型限制； 可鉴定多达6000个蛋白； 实验稳定度和重复度较高。 |
|
SILAC/Dimethyl |
体内标记定量蛋白质组学 |
可对比23 个样品； 体内标记，标记稳定，组间误差小； 需要的样本量较小，仅需几十微克的蛋白。 |
|
SWATH |
DIA 全景蛋白质组学 |
全景式、高通量、非质谱依赖的数据采集手段； 数据采集精准高效，线性范围； 检测蛋白丰度跨越 4个数量级； 可分析多达 2000 个蛋白质。 |
|
MRM |
绝对定量蛋白质组学 |
基于已知质谱信息来对目标分子进行分析的手段； 检测精准高效，可进行绝对定量分析； 实验结果重现性好，准确度高； 可精准鉴定低丰度蛋白。 |
蛋白质组学服务优势
1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;
2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;
3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;
4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;
5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。
三、单细胞质谱流式技术分析
单细胞质谱流式（Mass Cytometry）技术利用质谱技术对单细胞进行多参数检测，既有传统流式细胞术能够高速分析的特点，又兼并了质谱检测的高分辨能力。能够指定检测蛋白，避免漏掉丰度很低但又很重要的蛋白，且质谱流式技术通量相当高，可以实现大量细胞的检测。
百泰派克生物科技单细胞质谱流式分析方案
百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。
单细胞质谱流式服务优势
①技术先进，填补技术空白
采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。
②分析数量大，成本较低
单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。
③应用前景大
a)流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；
b)将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；
c)可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。
四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现
百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。
基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现分析策略
结果交付
1.所有鉴定的免疫多肽列表，新抗原肽以及肿瘤相关抗原肽列表；
2. 免疫多肽组数据质量分析，如研究案例中的数据报告。
五、生物药物表征
生物制药是通过现代医学研究手段结合生物生产技术研发生物医药技术产品，主要包括蛋白质、多肽、抗体、疫苗，以及生物诊断试剂等产品。近年来我国的生物医药领域一直保持着稳定发展速度，也一直占据着生物研究的热点。但是生物制品由于生物过程复杂，影响因素众多，使得生物制品在生产过程中可能引入新的杂质，或者造成生物制品本身结构性质变得不均一。这些因素可能削弱生物药物的疗效，甚至造成生物毒性和机体免疫反应等不良结果。所以生物药物在进入临床测试之前必须经过一系列严格检测来确定生物药物是否合规。百泰派克了解生物制药领域开发所面临的挑战，专注于提供完整的生物药物鉴定和分析服务。
百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。
生物药物表征服务内容
|
生物药物鉴定服务 |
产品变异性分析 |
生物药物纯度分析 |
|---|---|---|
| 点击立即咨询>> | 点击提交需求>> |
| 科研服务电话：182-4221-8588 | 访问品牌官网>> |
北京百泰派克生物科技有限公司（Beijing Bio-Tech Pack Technology Company Ltd. 简称BTP）从事以生物质谱为依托的生物药物表征，大分子物质（包括蛋白质、多肽、代谢物）质谱分析以及小分子物质检测服务。
1、公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；
2、获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务；
3、业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等；
4、7大质量控制检测平台，满足您一站式服务需求；
5、服务3000+企业，10000+客户的选择；
6、致力于为您提供优质的生物质谱分析服务!
![α-萘乙酸[NAA]【科研、组培用】](http://www.cnbio.net/file/upload/202409/04/17171473211147.jpg.middle.jpg)
![6-苄氨基嘌呤[6-BA]【科研、组织培养用】](http://www.cnbio.net/file/upload/202409/04/17140735211147.jpg.middle.jpg)