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膜蛋白(如受体和离子通道)是细胞功能的关键调节剂。膜蛋白占已知可药用靶标的三分之二,可见膜蛋白在生物制药行业中的重要性。
其中G蛋白偶联受体(GPCR)是最大的,用途最广泛的膜受体类蛋白,也是最重要的药物受体,占所有人类药物靶标的50%以上,并作为包括癌症在内的多种疾病的治疗靶标,包括心血管、代谢、中枢神经系统和炎症性等疾病。
离子通道代表着另一组重要的膜蛋白药物靶标,占目前上市药物的10%。尽管如此,制备出数量足够的、纯正的、折叠形式正确的膜受体用于药物开发仍然是一大挑战。
膜蛋白鉴定
1. 从细胞质、周质或细胞培养上清液中纯化膜蛋白。根据所使用的表达宿主或表达载体,从细胞质、(细菌)周质或细胞培养上清液中纯化蛋白质。
2. 缓冲液和去污剂筛选,用于增加溶解度和纯化。对于可溶性蛋白和膜蛋白,使用视差扫描荧光法(DSF)确定稳定性最佳的缓冲液的条件。如果适用,建立的活性分析法可用以关联稳定性和活性状态。对于膜或膜附着蛋白,在从细菌或真核生物膜中提取蛋白时需要使用去污剂。去污剂的使用,需要在提取和纯化步骤中针对蛋白质稳定性进行优化。如果蛋白质表达为包涵体,完成了再溶解和重折叠,可对最佳去污剂和缓冲液条件进行优化。
3. 使用His、Rho1D4、GST或strep标签进行亲和纯化。使用我们的高质量亲和纯化基质可以纯化与His,GST或Strep标签等标签融合的蛋白质。对于膜蛋白,我们建议使用Rho1D4系统,也可根据需求使用其他标签进行纯化。我司的纯化条件进行了优化,可根据目标蛋白的不同,可以放大至毫克量的纯化。服务可包括缓冲液和去污剂的优化,以提供具有最佳稳定性和活性的蛋白质。百泰派克生物会提供所有步骤的详尽文档,包括SDS-PAGE和Western Blot等数据。
进一步纯化步骤可用于准备结晶的均一性蛋白质组分。为了获得适合于,如蛋白质结晶实验或功能结合测定的蛋白质,可以使用例如阴离子或阳离子交换色谱或凝胶过滤进行第二或第三纯化步骤。