     |
自然界中发现的蛋白质大小从5kDa到400kDa不等。蛋白质水解过程将蛋白质切成较短片段，即肽段，蛋白质水解是肽质谱鉴定分析之前至关重要的一步，是蛋白质鉴定和表征、生物标记物的发现成功进行的基础。尽管质谱可以研究完整的蛋白质，但是较小的肽更容易进行蛋白质鉴定。且可提高蛋白质的覆盖率，因为蛋白质覆盖率由于溶解性和异质性可能会降低。因此，最常见的蛋白质组学方法往往会利用位点特异性酶切位点来产生较小的多肽片段。质量较小的肽段更容易通过高效液相色谱（HPLC）和HPLC偶联质谱进行分离和表征。
百泰派克基于质谱的蛋白鉴定示例
百泰派克生物科技提供两种水解蛋白质的方法：（1）凝胶内水解（聚丙烯酰胺凝胶基质中的蛋白质水解）；（2）溶液内水解（蛋白质在氯仿/甲醇中沉淀，然后在尿素中再溶解后进行）。通过一维或二维凝胶电泳分离的蛋白质，可直接在凝胶内进行水解，凝胶内水解，有效且可重现好，但比较费力费时。相较于凝胶内水解，溶液内水解方法更省力，所需的时间较少，但溶液内水解的蛋白，蛋白的再溶解度低，可能会导致一定的样品损失。
百泰派克生物科技可同时提供凝胶内水解和溶液内水解两种蛋白质水解相关服务。蛋白质水解的工作流程包括：
1. 制备裂解液；
2. 溶液内或凝胶内进行酶切;
3. 使用离液剂（如尿素和胍）使蛋白质变性；
4. 使用DTT还原二硫键；
5. 使用碘乙酸或碘乙酰胺将半胱氨酸烷基化；
6. 去除试剂和交换缓冲液；
7. 在适当的pH和温度下，用胰蛋白酶或其他蛋白酶在碳酸氢铵缓冲液中过夜变性约18小时；
8. 加入酸类物质终止酶切。
9. 蛋白质富集/清洗。
蛋白质水解的工作流程
样品要求
百泰派克生物科技可处理各种类型的样本，包括但不限于：
天然来源的蛋白质；
重组来源的融合蛋白和标记蛋白；
不同亚型的抗体；
膜蛋白及其他。
• 灵活性：我们提供凝胶内和溶液内水解两种蛋白质水解策略；
• 高准确性和覆盖范围：我们的水解服务可以大大提高质谱分析的准确性和覆盖范围。
• 应用广泛：可促进蛋白质的鉴定和表征，发现疾病的生物标志物，并有助于理解生物学过程。
• 完整的蛋白质组学服务：我们提供完整的蛋白质组学服务，涵盖蛋白质组学分析的整个过程，可对水解后的样品进行分析测定，一站式为您解决组学问题。
百泰派克生物科技还提供高通量自动化蛋白质水解服务，欢迎咨询。
