慢病毒滴度快速检测卡

说明:本类型检测卡检测范围约为:0-3000ng(本检测数据仅供参考，具体产品情况请参考相关批次检测报告)

一、原理

 

 

       本产品是基于胶体金侧向层析技术的HIV-1 P24蛋白半定量检测卡，可以用于相关慢病毒载体和假病毒包装效率的快速评估（P24蛋白是慢病毒外壳中含量最大的标志性蛋白）。检测卡由层析膜、样品垫、金标垫、层析膜、吸水纸、背板等结构组成。在层析膜上固定有羊抗鼠多克隆抗体（质控线）和P24鼠单克隆抗体（检测线）；在金标垫上固定有胶体金标记的另外一株P24鼠单克隆抗体。待测样品滴加到样品垫，通过毛细作用泳向金标垫，到达金标垫后，样品中的P24蛋白与金标垫鼠抗P24单克隆抗体结合形成复合物。复合物移动到检测线时，被检测线上的另一株P24鼠单克隆抗体所捕获。随着被捕获的复合物的堆积，在检测线上呈现出酒红色。当复合物泳动到质控线，羊抗鼠多抗捕获胶体金标记的鼠单克隆抗体，呈现酒红色。通过判读层析膜上检测线和质控线是否显色，判断样品中是否存在P24抗原。当样品中P24浓度变化时，检测线颜色的深浅与P24浓度呈正相关，通过与比色卡比较，可以半定量待检标本中P24蛋白浓度，并大致估算慢病毒的滴度。

 

 

 

二、用途

1.基于HIV-1的慢病毒载体包装效率检测：传统的慢病毒包装效率检测的方法有ELISA法（检测P24蛋白含量）和Real-time PCR法（检测核酸拷贝数），这两种方法都耗时费力，且成本高。本产品使用简便，检测时间短，可以随时对转染效果进行评估。如在更换培养基时，吸取样品滴加到试纸上，10-15min后即可判读结果。因此，使用本快速检测试纸，可以快速评估转染效果。

2.基于HIV-1的假病毒包装效率检测：同样含有P24蛋白，在转染后，可以使用本检测卡对包装效果进行快速评估。

 

          

图1. 检测卡显色样式

 

 

 

 

图2. 比色卡

 

 

 

*一个慢病毒颗粒（Lentiviral Particle, LP）中约有2000个P24蛋白分子，用以下公式可以计算慢病毒载体的颗粒数（LP）：

一个LP相当于：2000×24×103/(6×1023)g of P24=8×10-5 pg of P24；或者说，1ng P24=1.25×107 LPs（≈1.25×104-5 TU**）

**正常情况下，每100-1000 LPs中会有1个具有感染活性的病毒载体，即1 TU（Transducing Unit）。

注意：上述公式计算得到的LP值是理论值，检测样品中含有的游离的P24蛋白可能会使该值偏高。 

提示：通常上清中病毒含量需要超过106 TU/ml，才能确保浓缩纯化后得到足够浓度的慢病毒载体（一般能浓缩150倍左右）。