缓冲剂HEPES、PIPES的制备及注意事项

HEPES

HEPES是两性离子Good's缓冲液，在6.8至8.2的pH范围内有效。这使HEPES在生理pH值下成为有效的缓冲液。该缓冲液可用于多种生物的细胞培养基中。它也可用作蛋白质研究中的结合缓冲液，用于阳离子交换洗脱实验中，以及在凝胶电泳中用作运行缓冲液。

HEPES的制备步骤：

要制备1升1M HEPES缓冲溶液，请将238.30 g  HEPES溶解 在750 mL水中。使用10N氢氧化钠调节至所需的pH。

注意事项：

HEPES可溶于水，价格便宜，并且通常具有生物惰性。但是，它确实参与了产生自由基的氧化还原反应，并干扰了DNA和限制性内切酶之间的反应，但是由于空间位阻，其干扰程度小于Tris。同样重要的是要注意，当使用异质连接蛋白通道时，不应使用HEPES，因为它会抑制其功能。

PIPES

PIPES是哌嗪缓冲液家族的一员，与HEPES属于同一家族。它是两性离子Good's缓冲液，在6.1至7.5的pH范围内有效。由于pH范围与HEPES略有不同，PIPES的浓度仅为HEPES浓度的一半。该缓冲剂不会与金属络合，因此可用于含金属离子的溶液。

PIPES的制备步骤：

要制备1升1M PIPES游离酸缓冲溶液，请将302.37g  PIPES游离酸添加到600 mL 水中。使用10N氢氧化钠调节至所需的pH值。

注意事项：

直到溶液的pH值升高到6.5以上时，PIPES的游离酸才容易溶解，但是PIPES的钠盐很容易溶解。如果使用的是游离酸形式的缓冲液，请使用氢氧化钠将其转化为钠盐，以提高在较低pH下的溶解度。像HEPES一样，PIPES不适用于涉及氧化还原反应的实验，因为它会导致自由基的形成。