探针法维容氏支原体实时定量PCR试剂盒

探针法维容氏支原体实时定量PCR试剂盒

Probe-quantitative Real-time PCR Kit for Mycoplasma wenyonii

货号：Mqt-wen-20      规格：20个反应

货号：Mqt-wen-50      规格：50个反应

货号：Mqt-wen-100     规格：100个反应

储存：-20度，避光保存，有效期一年。避免反复冻融。

试剂盒特点：

1，  特异性检测维容氏支原体，准备样品时注意不要污染其他动物血制品。

2，  灵敏度高，反应液中仅1个基因组时检出率为58%。线性范围跨越8个数量级。

3，  使用的DNA聚合酶具有抗抑制能力强和热稳定性好的特点；采用热启动方式，可抑制非特异性扩增，降低背景荧光。

4，  带有阳性对照样品（组分C），可用于检验试剂盒有效性。

5，  带有dUTP和UDG酶，可降低残留DNA的污染。

嗜血支原体（Hemotropic Mycoplasma，或hemoplasma)是一类寄生于红细胞表面的细菌，无细胞壁，可以感染很多哺乳动物，包括猫、犬、猪、牛、羊等，也包括人类。嗜血支原体曾被命名为血巴通氏体（Hemobartonella）和附红细胞体（Eperythrozoon），根据16S rRNA基因序列分析，被重新归类为支原体。在牛体内已发现的嗜血支原体有两种：维容氏支原体（Mycoplasma wenyonii）和Candidatus Mycoplasma haemobos。

维容氏支原体，旧称维容氏附红细胞体（Eperythrozoon wenyonii），首次发现于1934年，目前为止仅在牛体内发现。血涂片检测结果显示，其游离于血浆或附着在红细胞表面，在全世界广发分布，可与无形体（Anaplasma）、巴贝虫（Babesia）和泰勒虫（Theileria）形成共感染。多数情况下牛在感染后无临床表现，有时会出现贫血、发热、后肢水肿、乳头肿胀、产奶量突降和体重减轻等症状。感染后很难完全清除，可能终身带菌。一般认为吸血性节肢动物是其传播途径。

维容氏支原体尚无合适的体外培养方法，因此难以开发蛋白类检测方法。检测方法一般采用吉姆萨染色的血涂片法。血涂片法的检测灵敏度和特异性均比较差，容易受到人工制片方法和血液里其他成分（如：Howell–Jolly体）的干扰，且支原体易从红细胞表面脱落，造成漏检。而PCR法在灵敏度上则有明显的优势，且可以区分支原体种类。定量PCR法与普通PCR法相比，不仅可以精确定量，而且操作更为方便，更少受环境污染的影响。

本试剂盒基于16S rRNA基因设计特异性引物和探针，可以准确识别维容氏支原体，与羊支原体（Mycoplasma ovis）、猪支原体（Mycoplasma suis）、以及寄生于梅花鹿的Candidatus Mycoplasma haemocervae和Candidatus Mycoplasma erythrocervae有交叉反应，而与Candidatus Mycoplasma haemobos及其他生物的基因组无交叉反应。由于嗜血支原体对宿主有严格的特异性，检测时只需注意严格操作，不污染其他动物的血源，就不会对检测造成干扰。对不同健康状况的牛群进行检测，在159只患致命贫血牛中获得133个阳性，在57只患不相关疾病牛中获得33个阳性，在61只健康牛中获得38个阳性，而在47只健康牛犊中只获得2个阳性。

本试剂盒包含热启动DNA聚合酶、dNTP（以dUTP代替dTTP）、引物、探针、阳性对照品、ROX染料，和用以防止残余DNA污染的UDG（Uracil- DNA Glycosylase，尿嘧啶-DNA-糖基酶），用户只需准备好DNA样品即可使用。

本试剂盒采用的DNA聚合酶源自极端嗜热菌（Thermus thermophilus），经改造后较普通的Taq酶具有更强的抗抑制能力和热稳定性。通过结合特异性单克隆抗体，在室温下DNA聚合酶活性被抑制。在PCR循环的热变性阶段，抗体受热被去除，此时DNA聚合酶活性恢复，因此获得“热启动”功能。热启动可减少残余DNA的污染，提高PCR扩增效率、灵敏度和目的片段产量。

UDG和dUTP用于消除PCR扩增中的残余污染。dUTP可以确保扩增后的DNA中均含有尿嘧啶。UDG可从单链或双链DNA上去除尿嘧啶残基，从而阻止含有尿嘧啶的DNA作为模板继续扩增。UDG在正常的PCR循环过程中被高温灭活，对PCR反应没有影响。

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