探针法M. turicensis实时定量PCR试剂盒

探针法Candidatus Mycoplasma turicensis实时定量PCR试剂盒

Probe-quantitative Real-time PCR Kit for Candidatus Mycoplasma turicensis

货号：Mqt-tur-20      规格：20个反应

货号：Mqt-tur-50      规格：50个反应

货号：Mqt-tur-100     规格：100个反应

储存：-20度，避光保存，有效期一年。避免反复冻融。

试剂盒特点：

1，  特异性检测Candidatus Mycoplasma turicensis，与其他生物基因组没有交叉反应。

2，  使用的DNA聚合酶具有抗抑制能力强和热稳定性好的特点；采用热启动方式，可抑制非特异性扩增，降低背景荧光。

3，  带有阳性对照样品（组分C），可用于检验试剂盒有效性。

4，  带有dUTP和UDG酶，可降低残留DNA的污染。

嗜血支原体可以感染很多哺乳动物，包括猫、犬、猪、牛、羊等，也包括人类。目前已知寄生于猫血中的支原体有三种：猫血支原体（Mycoplasma haemofelis），Candidatus Mycoplasma haemominutum和Candidatus Mycoplasma turicensis。这些细菌粘附在红细胞表面生长，也会给宿主造成一些疾病，尤其是在猫免疫力下降的时候。有报道约14%的贫血猫呈血液支原体阳性。Candidatus Mycoplasma turicensis寄生于猫红细胞表面，在上述三种支原体中致病能力中等，且常与另两种支原体合并感染，可引起温和到急性的溶血性贫血，与猫免疫缺陷病毒合并感染时，或者可的松类药物处理后，临床症状加重。

嗜血支原体无法在体外培养，因此难以开发蛋白类检测方法。常用的检测方法包括显微镜镜检法和PCR法。镜检法灵敏度低，实验误差大，无法区分支原体种类，易受血液中其他物质以及人工涂片方法的干扰，且支原体易从红细胞表面脱落，造成漏检。而PCR法在灵敏度上则有明显的优势，且可以区分支原体种类。定量PCR法与普通PCR法相比，不仅可以精确定量，而且操作更为方便，更少受环境污染的影响。

本试剂盒基于16S rRNA基因的保守区域，设计特异性引物和探针，可以准确识别Candidatus Mycoplasma turicensis，与其他生物基因组没有交叉反应。在236份猫血样品中，检测获得14个阳性，其中2个为Candidatus Mycoplasma turicensis单独感染，2个为与猫血支原体共感染，3个为与Candidatus Mycoplasma haemominutum共感染，以及7个三种嗜血支原体共感染。

本试剂盒包含热启动DNA聚合酶、dNTP（以dUTP代替dTTP）、引物、探针、阳性对照品、ROX染料，和用以防止残余DNA污染的UDG（Uracil- DNA Glycosylase，尿嘧啶-DNA-糖基酶），用户只需准备好DNA样品即可使用。

本试剂盒采用的DNA聚合酶源自极端嗜热菌（Thermus thermophilus），经改造后较普通的Taq酶具有更强的抗抑制能力和热稳定性。通过结合特异性单克隆抗体，在室温下DNA聚合酶活性被抑制。在PCR循环的热变性阶段，抗体受热被去除，此时DNA聚合酶活性恢复，因此获得“热启动”功能。热启动可减少残余DNA的污染，提高PCR扩增效率、灵敏度和目的片段产量。

UDG和dUTP用于消除PCR扩增中的残余污染。dUTP可以确保扩增后的DNA中均含有尿嘧啶。UDG可从单链或双链DNA上去除尿嘧啶残基，从而阻止含有尿嘧啶的DNA作为模板继续扩增。UDG在正常的PCR循环过程中被高温灭活，对PCR反应没有影响。

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