探针法肺炎支原体实时定量PCR试剂盒

探针法肺炎支原体实时定量PCR试剂盒

Probe-quantitative Real-time PCR Kit for Mycoplasma pneumoniae

货号：Mqt-pne-20      规格：20个反应

货号：Mqt-pne-50      规格：50个反应

货号：Mqt-pne-100     规格：100个反应

储存：-20度，避光保存，有效期一年。避免反复冻融。

试剂盒特点：

1，  特异性检测肺炎支原体，与其他生物基因组没有交叉反应。

2，  灵敏度高，最低检测极限低于每反应10个基因组。

3，  使用的DNA聚合酶具有抗抑制能力强和热稳定性好的特点；采用热启动方式，可抑制非特异性扩增，降低背景荧光。

4，  带有阳性对照样品（组分C），可用于检验试剂盒有效性。

5，  带有dUTP和UDG酶，可降低残留DNA的污染。

肺炎支原体（Mycoplasma Pneumoniae）属于最小的自我复制型生物之一，是导致支原体肺炎的人类病原体。其细胞呈细长形状，长约1-2μm，宽约0.1-0.2μm，光学显微镜下无法检测；其菌落的长度通常小于100μm，需要立体显微镜来观察。肺炎支原体寄生于人类的呼吸道上皮，通过附着细胞器粘附于呼吸上皮细胞，然后与宿主细胞融合并进入细胞内，逃避宿主免疫系统的检测，并调节细胞膜的组成以模拟宿主细胞膜。因此肺炎支原体易于产生慢性或潜伏性感染，而且因其细胞膜组成与人细胞相似，可能导致几种器官和组织中的自身免疫反应。

肺炎支原体分布遍及全球，可引起多种症状，包括：肺炎、支气管炎、上呼吸道疾病，有时并不表现出症状，通常与其他细菌或病毒难以区分。肺炎支原体经常在患呼吸道疾病的病人中被发现，并且还与多发性关节炎、中风、传染性神经元炎、冠状动脉疾病等有关。肺炎支原体是肺炎的重要致病因子，据报道，在大众群体中占所有获得性肺炎病例的10-30%，在封闭性群体（如住宿的学生、军人）中则占25-71%。

肺炎支原体体外培养时生长缓慢，有时需数周的时间，因此很少使用体外培养法检测。其他可能的检测方法包括：免疫印迹，免疫荧光染色，血细胞吸附试验，四唑还原，代谢抑制试验，血清学试验和聚合酶链式反应（PCR）等。由于成本低，测试时间相对较短，EIA血清学分析是最常用的肺炎支原体检测方法，其缺点在于需要使用活组织，这种取样方式可能会加大感染的严重程度。血清学方法通常特异性和灵敏度都比较低，且只能做回顾性检测。PCR是确定肺炎支原体存在的最快速和最有效的方法，有更高的灵敏度和更强的特异性，且检测时间短，仅需几个小时即可获得结果。定量PCR法与常规PCR法相比，不仅可以精确定量，而且操作更为方便，更少受环境污染的影响。

本试剂盒选择核细胞黏附素基因作为靶点，特异性识别肺炎支原体，经BLAST验证，与其他生物基因组没有交叉反应。本试剂盒检测了分布范围类似的28种细菌和6种病毒，未发现非特异信号；对49个组织样品DNA进行检测，发现38个阳性，与常规PCR方法检测结果一致。

本试剂盒包含热启动DNA聚合酶、dNTP（以dUTP代替dTTP）、引物、探针、阳性对照品、ROX染料，和用以防止残余DNA污染的UDG（Uracil- DNA Glycosylase，尿嘧啶-DNA-糖基酶），用户只需准备好DNA样品即可使用。

本试剂盒采用的DNA聚合酶源自极端嗜热菌（Thermus thermophilus），经改造后较普通的Taq酶具有更强的抗抑制能力和热稳定性。通过结合特异性单克隆抗体，在室温下DNA聚合酶活性被抑制。在PCR循环的热变性阶段，抗体受热被去除，此时DNA聚合酶活性恢复，因此获得“热启动”功能。热启动可减少残余DNA的污染，提高PCR扩增效率、灵敏度和目的片段产量。

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