探针法M. haematoparvum实时定量PCR试剂盒

探针法Candidatus Mycoplasma haematoparvum实时定量PCR试剂盒

Probe-quantitative Real-time PCR Kit for Candidatus Mycoplasma haematoparvum

货号：Mqt-hpa-20      规格：20个反应

货号：Mqt-hpa-50      规格：50个反应

货号：Mqt-hpa-100     规格：100个反应

储存：-20度，避光保存，有效期一年。避免反复冻融。

试剂盒特点：

1，  本试剂盒可以特异性检测Candidatus Mycoplasma haematoparvum，不受犬类携带微生物的影响。

2，  本试剂盒灵敏度高，最低检出值接近1个基因组。

3，  本试剂盒使用的DNA聚合酶具有抗抑制能力强和热稳定性好的特点；采用热启动方式，可抑制非特异性扩增，降低背景荧光。

4，  本试剂盒带有阳性对照样品（组分C），可用于检验试剂盒有效性。

5，  带有dUTP和UDG酶，可降低残留DNA的污染。

嗜血支原体可以感染很多哺乳动物，包括猫、犬、猪、牛、羊等，也包括人类。目前已知寄生于犬血中的支原体有两种：犬血支原体（Mycoplasma haemocanis，旧称Haemobartonella canis)和Candidatus Mycoplasma haematoparvum。Candidatus Mycoplasma haematoparvum于2004年在一只行脾切除手术后的犬中首次被发现，随后发现其在世界多个地区广泛分布，阳性率在0-33.3%不等。Candidatus Mycoplasma haematoparvum与Candidatus Mycoplasma haemominutum较为相似，直径为0.3微米，无成串相连现象，很少引起明显的溶血，除非是做了脾切除手术或者发生了免疫抑制。

嗜血支原体无法在体外培养，因此难以开发蛋白类检测方法。常用的检测方法包括显微镜镜检法和PCR法。镜检法灵敏度低，实验误差大，无法区分支原体种类，易受血液中其他物质以及人工涂片方法的干扰，且支原体易从红细胞表面脱落，造成漏检。而PCR法在灵敏度上则有明显的优势，且可以区分支原体种类。定量PCR法与普通PCR法相比，不仅可以精确定量，而且操作更为方便，更少受环境污染的影响。

本试剂盒基于16S rRNA基因的保守区域，设计特异性引物和探针，可以准确识别Candidatus Mycoplasma haematoparvum，不受犬类携带微生物的影响。对184个犬血样品的检测获得7个阳性，其中2个为与犬血支原体共感染。

本试剂盒包含热启动DNA聚合酶、dNTP（以dUTP代替dTTP）、引物、探针、阳性对照品、ROX染料，和用以防止残余DNA污染的UDG（Uracil- DNA Glycosylase，尿嘧啶-DNA-糖基酶），用户只需准备好DNA样品即可使用。

本试剂盒采用的DNA聚合酶源自极端嗜热菌（Thermus thermophilus），经改造后较普通的Taq酶具有更强的抗抑制能力和热稳定性。通过结合特异性单克隆抗体，在室温下DNA聚合酶活性被抑制。在PCR循环的热变性阶段，抗体受热被去除，此时DNA聚合酶活性恢复，因此获得“热启动”功能。热启动可减少残余DNA的污染，提高PCR扩增效率、灵敏度和目的片段产量。

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