探针法猫血支原体实时定量PCR试剂盒

探针法猫血支原体实时定量PCR试剂盒

Probe-quantitative Real-time PCR Kit for Mycoplasma haemofelis

货号：Mqt-hfe-20      规格：20个反应

货号：Mqt-hfe-50      规格：50个反应

货号：Mqt-hfe-100     规格：100个反应

储存：-20度，避光保存，有效期一年。避免反复冻融。

试剂盒特点：

1，  特异性检测猫血支原体和犬血支原体，不受其他基因组干扰。

2，  灵敏度高，最低可检出反应液中的2个基因组。

3，  使用的DNA聚合酶具有抗抑制能力强和热稳定性好的特点；采用热启动方式，可抑制非特异性扩增，降低背景荧光。

4，  带有阳性对照样品（组分C），可用于检验试剂盒有效性。

5，  带有UDG酶和dUTP，可降低残留DNA的污染。

嗜血支原体可以感染很多哺乳动物，包括猫、犬、猪、牛、羊等，也包括人类。猫血支原体（Mycoplasma haemofelis），或称为猫嗜血支原体、猫附红细胞体，寄生于猫红细胞表面，具多形性，可呈现为球状、环状或杆状，对红细胞有破坏作用，可引起传染性溶血贫血症，有时呈急性发作，可致命；有时呈慢性发作，出现嗜睡、厌食、粘膜惨白及黄疸、发烧、脾脏肿大等症状，并可能出现反复发作。其传播途径为血液传播，包括：吸血昆虫叮咬、咬伤、输血等。

目前已知寄生于猫血中的支原体有三种：猫血支原体，Candidatus Mycoplasma haemominutum和Candidatus Mycoplasma turicensis。在PCR技术出现之前，这三种支原体被统称为猫血巴尔通氏体（Haemobartonella felis）。这些细菌粘附在红细胞表面生长，有时会给宿主造成一些疾病，尤其是在猫免疫力下降的时候。有报道约14%的贫血猫呈血液支原体阳性。猫血支原体的致病能力强于另两种支原体。这三种支原体常发生双重或三重感染，猫血支原体往往是检出拷贝数最少的，因此需要单独的检测方法排除另两种支原体的干扰。

寄生于犬血中的支原体有两种：犬血支原体（Mycoplasma haemocanis，旧称Haemobartonella canis)和Candidatus Mycoplasma haematoparvum。犬血支原体与猫血支原体亲缘关系非常近，形态也类似。在实验条件下，猫可以感染犬血支原体，而犬不能感染猫血支原体。犬血支原体可能的临床表现有：无症状、脱水、轻度贫血、心跳过速、黄疸、死亡，但是很少引起明显的溶血，除非是做了脾切除手术或者发生了免疫抑制。犬血支原体是犬类中最常见的嗜血支原体，分布极为广泛，阳性率大约在0.5-40%之间。

嗜血支原体无法在体外培养，因此难以开发蛋白类检测方法。常用的检测方法包括显微镜镜检法和PCR法。镜检法灵敏度低，实验误差大，无法区分支原体种类，易受血液中其他物质以及人工涂片方法的干扰，且支原体易从红细胞表面脱落，造成漏检。而PCR法在灵敏度上则有明显的优势，且可以区分支原体种类。定量PCR法与普通PCR法相比，不仅可以精确定量，而且操作更为方便，更少受环境污染的影响。

本试剂盒基于16S rRNA基因的保守区域，设计特异性引物和探针，可以准确识别猫血支原体和犬血支原体，与Candidatus Mycoplasma haemobos有微弱的交叉反应。Candidatus Mycoplasma haemobos寄生于牛血中，不会对本试剂盒的检测产生影响。对1585个猫血样品进行检测，获得45个阳性，其中有25个为与另两种猫嗜血支原体共感染。

本试剂盒包含热启动DNA聚合酶、dNTP（以dUTP代替dTTP）、引物、探针、阳性对照品、ROX染料，和用以防止残余DNA污染的UDG（Uracil- DNA Glycosylase，尿嘧啶-DNA-糖基酶），用户只需准备好DNA样品即可使用。

本试剂盒采用的DNA聚合酶源自极端嗜热菌（Thermus thermophilus），经改造后较普通的Taq酶具有更强的抗抑制能力和热稳定性。通过结合特异性单克隆抗体，在室温下DNA聚合酶活性被抑制。在PCR循环的热变性阶段，抗体受热被去除，此时DNA聚合酶活性恢复，因此获得“热启动”功能。热启动可减少残余DNA的污染，提高PCR扩增效率、灵敏度和目的片段产量。

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