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水迷宫
水迷宫(Morriswatermaze,MWM,Morris)实验是一种测试实验动物对空间位置感和方向感(空间定位)的学习记忆能力的实验方法,应用于海马/外海马研究、学习记忆、智力与衰老、老年痴呆等行为生物学等多个学科的科学研究和计算机辅助教学等领域,在世界上已经得到广泛地认可,是行为学研究尤其是学习与记忆研究的经典实验。
实验步骤
水迷宫装置:独立的实验房间内放置可调节光强的台灯,调至柔和光照,以减少水面反光。圆形水槽直径150cm,高60cm,加水至淹没平台2-3cm,用内置加热器将水温保持在25℃(±1℃)。向水中加入墨汁将水染至看不见水下的平台。圆形水迷宫被两条经过圆心且互相垂直的直线分作四个象限,依次定义为第一象限,第二象限,第三象限,第四象限。将一个直径10cm的黑色圆形平台置于第二象限,四次训练中动物入水点分别位于各象限圆弧中央,圆形水槽圆心垂直上方约2.5米处置有视频采集系统,其视角可以覆盖整个实验区域,记录大鼠的游泳轨迹。实验期间保持环境安静并保持水迷宫外的视觉参照物位置固定不变。
实验一共分为四个阶段:定向巡航阶段( acquisition phase ,AP); 空间探索测试(space exploring test, SET);反向学习阶段(reversal phase, RP);反向测试(reversal exploring test, RET )。
第一阶段:定向巡航阶段(AP)第1-4天每天上午9点训练一次,连续训练4天。每次训练大鼠分别从4个象限圆弧中点入水,检测4个象限的逃避潜伏期,取其平均值作为该次的逃避潜伏期。相邻两次训练间隔为30min,在间隔时间内,其他大鼠进行训练。规定每次的实验时间为60s,如果大鼠在规定时段内未找到平台,则实验组将其引导至隐蔽平台之上并保证其在上停留3s。如果大鼠已找到平台,则必须保障其在平台上站立3s以强化记忆。在此阶段中,一般记录三个参数,逃避潜伏期(从入水点到找到平台的时间)、游泳速度和游泳路程(从大鼠进入水中至找到隐蔽平台的游泳轨迹的长度)。
第二阶段:空间探索测试阶段(SET)第五天进行。此测试阶段中,水下的隐蔽平台被移出水槽,设定时间为60s,记录大鼠在60s内在目标象限(第二象限)游泳时间百分比和穿越原来平台放置区域的次数。此测试只进行一次。
第三阶段:反向学习阶段(RP)。第6天第7天进行。在这个阶段中,隐蔽平台被放置于第三象限,即平台之前所在象限的对侧。每天上午1次,连续两天,操作方法同第一阶段。
第四阶段:反向探索测试(RET)。第8天进行。反向学习阶段结束后,将平台移出水槽,对大鼠进行单次入水试验。方法同空间探索测试。记录大鼠在新平台象限(第二象限)寻找平台所用的时间占总时间的百分比以及穿越新平台区域的次数。
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