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酶促化学发光的的鲁米诺试剂以及直接化学发光的吖啶酯类试剂都是化学发光免疫常用的试剂,化学发光免疫已经取代酶联免疫成为更为主流的体外诊断检测方法,在生化检测方法中的占比超过50%。
化学发光免疫作为一种体外诊断检测技术的吸引之处在于检测的简单性。化学发光的实质是自身发光,这意味着化学发光的分析测试仪器只需要提供一种可以检测光信号和记录结果的方法就可以了。自发光检测仪需要一个闭光的样品室和光检测器。最简单的便是相片纸或X光片,甚至视觉检测器都可以。
化学发光试剂
化学发光检测方法的方便性使得它的应用简单化并且完全可以自动化,但是它的灵敏度又是怎样的呢?化学发光有如下两种内在优势。
绝大多数的样品没有背景信号,如它们自身不发光。
化学发光的检测不是一个比例测试,这是与荧光和吸收或比色测试不同的。在荧光测试中,具有小的stokes shift的荧光基团非常难检测,荧光很难从激发波长中分辨出来。
另外一个问题是,特别在样品是浑浊的情况下有一部分杂光会进入到检测器。在吸光测试上,其吸光度受到限制的根本因素是需要在两个相对较强的信号上去区分一个较小的差别。
需要注意的是检测器对光谱敏感性尽可能接近化学发光的光谱,已得到最大化灵敏度。一般在自发光仪中的光电倍增管对蓝光有最佳的反应,对红光的末端光谱不太敏感。固态检测器对红光有较好的反应。
X光片广泛应用于记录在尼龙膜、纤维素膜或PVDF膜上的化学发光印迹分析。但是我们需要牢记在心的是X光片仅用于检测从紫外到蓝光光谱范围内的光信号,虽然有一些特殊的光片对增强的绿光有敏感性。
化学发光检测既有液体样品也有固体样品,描绘化学发光检测的指标通常是灵敏度、线性和动态范围。德晟的化学发光试剂包括鲁米诺、异鲁米诺以及六种吖啶酯发光底物。