吖啶酯在标记核酸上的用途

吖啶酯(NSP-DMAE-NHS)，黄色粉末，CAS号:194357-64-7，是一种重要的化学发光试剂，它的化学发光量子产率比鲁米诺高，而且吖啶酯标记条件温和，标记率高，标记后不影响分离。除此之外，吖啶酯的化学发光过程反应迅速，本底低，在氢氧化钠和过氧化氢的存在下即可发光。在氧化反应过程中，结合物被分解，不影响游离吖啶酯的发光；另外，吖啶酯类化学发光试剂具有较好的稳定性，易于储存。
吖啶酯除了在免疫测定中的应用之外，还可以标记寡核苷酸片段探针应用于基因测定或微生物测定。吖啶酯化合物很适合于标记DNA链以制造化学发光DNA探针。现代医学研究成果表明，许多疾病如癌症和遗传疾病的发生都与DNA的突变有关，且许多传染性疾病是由环境中的病毒、病菌或寄生虫引起的，对病毒特定序列DNA的分析有利于疫情的控制。对DNA序列以及其链中碱基突变的检测在基因筛选、遗传疾病早期诊断和治疗、病原基因测定方面具有十分深远的意义。
在核酸杂交分析中，制备特异性强、灵敏度高的标记探针是核酸杂交分析成功的关键，吖啶酯衍生物可以直接标记在核酸探针上，不需催化剂且发光量子产率不受影响；另外，在一定条件下，未杂交的单链DNA上标记的吖啶酯被水解破坏，只有杂交形成的双链保护的吖啶酯才能产生化学发光，不需分离即可监测整个杂交过程。
一种吖啶酯标记核酸的方法，所述方法包括以下步骤：
(1) DNA探针5’端、3’端保护；
(2) 吖啶酯标记：25mM NHS吖啶酯溶解于DMSO中，配置1M HEPES缓冲液(PH＝8.0) ，按照摩尔比核酸探针：NHS吖啶酯＝1:5的条件，加入到HEPES缓冲液中，37℃反应1h；
(3) HPLC纯化。在所述步骤(1) 中DNA探针5’端、3’端保护具体包括：采用三氟硫代乙酸S-乙酯，对5’端-NH 2进行保护；采用三氟硫代乙酸S-乙酯，对3’端-NH 2 进行保护。
德晟科技在12年就一直在研发化学发光试剂，研制成功后投入市场得到了客户的普遍认同。研发生产的吖啶酯有6种不同基团的产品，化学发光试剂除了吖啶酯还有鲁米诺、异鲁米诺。吖啶酯系列的发光效率较高，属于直接发光。