毕赤酵母KM71H 百欧博伟生物 质控菌种

毕赤酵母KM71H 百欧博伟生物 质控菌种

北京百欧博伟生物技术有限公司（biobw）是北京的一家专业于生物技术的研究与广泛运用及推广的高科技公司，位于北京企业林立的丰台区造甲街，生物技术推广及运用早于2011年开始，成立公司于2013年一月。本公司主要提供色谱耗材、色谱仪器、固相萃取装置、化学试剂、样品瓶、氘灯、标准品、微生物技术、菌种保藏服务以及ATCC产品代理等产品及服务。

基本信息

平台编号：bio-104396

规格：500ul甘油菌

拉丁属名：0

中文名：毕赤酵母KM71H

菌株类型：毕赤酵母

培养基：YPD培养基

生长条件：28-30 ℃,  有氧

基因型：aox1::ARG4, arg4

表型：MutS, Arg+

抗性：氨苄和卡那

质粒转化条件：电转

应用：蛋白表达

诱导方法：甲醇

菌株特点

KM71H是毕赤酵母菌株，属于真核细胞。一般的针对原核生物的抗生素例如卡那和氨苄对酵母是无效的，因此为了防止大肠杆菌等原核生物对酵母培养菌株污染，往往会在培养基中加入一些氨苄和卡那霉素的抗生素，来抑制细菌菌的污染和生长。

毕赤酵母适宜的生长温度是28至30度，温度超过32度对蛋白的表达是有害的，并可能导致细胞的死亡。

KM71H毕赤酵母可以在YPD培养基中生长。

KM71H毕赤酵母被推荐用来表达含有Zeocin抗性的载体载体重组质粒，例如pPICZ A,B,C系列的载体。

在筛选KM71H重组转化菌株时，Zeocin抗生素的工作浓度是100 ug/ml。

KM71H宿主菌中的AOX1基因含有一个片段缺失，当pPICZ A,B,C或者pPICZα A,B,C转化到KM71H中时只能产生出MutS转化株，不必在进行Mut基因型的筛选了。

KM71H的来源母细胞在精氨琥珀酸裂解酶基因(arg4)含有一个突变,这使得菌株无法在不含有精氨酸的培养基中生长。而KM71H酵母细胞中在AOX1基因处插入了一个正常的arg4基因，从而形成了KM71H的MutS, Arg+  表型。

将约2kb 的Arg4基因克隆出来后插入到KM71H来源菌株内的野生型的AOX1基因的BamH I（16 bp）和Sal I（227 bp）中间，从而构建成功KM71H。ARG4基因直接替换了AOX1基因 的16-227片段序列。

KM71H毕赤酵母细胞的优点是不需要利用甲醇minimal media筛选菌株的Mut基因型，因为所有的转化株都是MutS菌株。另外，AOX1基因并没有被完全删除，理论上你可以用自己的基因替换其中的Arg4基因，从而生成MutS, Arg-的转化株，但是由于实验表明该基因型酵母菌株在含有精氨酸的minimal media上并不能很好的生长，所以并不鼓励大家进行这种基因替换尝试。

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