蛋白质胶条鉴定

https://www.abace-biology.com/identification-of-protein-adhesive.htm

对简单的蛋白混合物，我们采用LC-ESI-MS/MS技术进行蛋白质鉴定。样品类型包括：

• SDS-PAGE胶条

• IP、Co-IP得到的蛋白复合物

• Pull-down方法制备的蛋白混合物

• 其他蛋白混合物

技术原理

电喷雾电离质谱（electrospray ionization mass spectrometry，ESI-MS）是在毛细管的出口处施加一高电压，所产生的高电场使从毛细管流出的液体雾化成细小的带电液滴，随着溶剂蒸发，液滴表面的电荷强度逐渐增大，最后液滴崩解为大量带一个或多个电荷的离子，致使分析物以单电荷或多电荷离子的形式进入气相。电喷雾离子化的特点是产生高电荷离子而不是碎片离子，使质量电荷比降低到多数质量分析仪器都可以检测的范围，因而扩展了分子量的分析范围，离子的真实分子质量也可以根据质荷比及电荷数算出。

电喷雾质谱的优势就是它可以方便地与多种分离技术联合使用，一般与液相色谱（LC）联用，可以对复杂样品进行质谱分析，根据样品在色谱中不同的保留时间对其进行分离后鉴定，提高了分析的效率和精确度。

 ESI-MS质谱工作原理技术流程技术特点

• 高通量，一次可鉴定多种蛋白质；

• 灵敏度高：可检测样品浓度较低的胶点；

• 通用性强，可分析蛋白质条带、免疫共沉淀洗脱液等多种形式的样品。；

• 液相与质谱连用，自动化操作，分析速度快，分离效果好。

样本要求

• SDS-PAGE胶条：银染、考染条带可见；

• 蛋白质溶液：蛋白质总量>5μg，浓度>0.1μg/μl。

技术平台
Thermo Scientific Q Exactive