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高通量sgRNA文库筛选服务是用全基因组或特定通路的sgRNA文库在指定细胞内通过功能性筛选、富集以及随后的PCR扩增和深度测序分析,挖掘与表型相关的基因或在全基因组范围内筛选药物新靶点。sgRNA文库结合高通量筛选技术在药物研发、基因功能研究、分子诊断、疾病治疗和作物育种等领域均发挥的重要的作用。安必奇生物的CRISPR/Cas9平台可提供高通量sgRNA文库筛选服务,我们的服务涵盖sgRNA文库构建,细胞转染,细胞筛选,高通量测序,功能基因筛选和功能机制分析。我们不仅能帮助广大客户制备全基因组或特定通路的sgRNA文库,还可以完成下游的细胞筛选和高通量测序,挖掘相关的功能基因或药物靶点并解析其机制。
sgRNA文库筛选服务流程
1. sgRNA设计与文库构建:高通量的sgRNA文库。
2. 细胞转染与筛选:目的细胞侵染和功能实验;阳性细胞筛选。
3. 功能基因筛选:PCR扩增sgRNA;高通量测序及数据分析;单基因功能验证。
4. 功能基因机制研究:细胞生物学功能实验;表达谱芯片分析通路机制;下游基因功能研究。
安必奇生物为广大客户提供sgRNA文库筛选服务,包括CRISPR敲除筛选,CRISPR激活筛选和CRISPR抑制筛选。
CRISPR敲除筛选
CIRSPR基因敲除筛选可以挖掘基因组范围内的功能缺失型基因,还有助于揭示已知基因的新功能,结合不同的化合物筛选可以有效地发现药物的新靶点。
CRISPR激活筛选
CRISPR激活筛选的原理是将切割活性缺失的dCas9与转录激活因子(如VPR,VP64)融合,在sgRNA的引导下靶向基因上游转录激活区域并有效激活基因的表达。CRISPR激活筛选已经被应用于高通量的功能获得型基因筛选,还有助于研究在天然条件下表达量较低的基因。
CRISPR抑制筛选
CRISPR抑制筛选的原理是将切割活性缺失的dCas9与转录抑制因子(如:KRAB)融合,在sgRNA的引导下有效的抑制靶基因的表达。与敲除筛选相比,CRISPR抑制筛选是通过下调基因表达来筛选功能基因,是揭示敲除致死型基因功能的有效方法。
高通量sgRNA文库筛选应用
探索药物作用机制:药物靶点确定与验证
寻找肿瘤治疗靶点:上下游调控机制分析
探究代谢疾病治疗机制:代谢通路调节机制分析
我们的优势
CRISPR筛选和高通量表型分析相结合。
应用范围广,适用于解决多种问题和研究领域。
从sgRNA文库构建到功能基因或药物靶点的筛选和验证。