鲁米诺CAS521-31-3在蛋白质WB实验中的应用

化学发光试剂鲁米诺，全称3-氨基苯二甲酰肼，俗名发光氨luminol，通常用于酶促化学发光实验以及刑侦上的微量血迹检测。由于其结构简单、易合成、发光量子效率高的特点，现也被用于蛋白质印迹试验western blot中。
蛋白免疫印迹是将经过PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）分离的蛋白质样品，转移到固相载体NC膜（硝酸纤维素薄膜）或PVDF膜（聚偏二氟乙烯膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。

鲁米诺的发光反应是属于整个蛋白质Western Blot印迹实验中的最后一步，加入1：1的溶液A和溶液B，覆盖pvdf膜，可以显色或发光来观察实验结果。一般使用的发光液A和B分别是鲁米诺和过氧化氢。
由于鲁米诺被过氧化氢催化氧化发光的反应需要过氧化物酶的参与，属于酶促化学发光，需要维持反应的pH值，实验中的匀浆缓冲液通常用我们Tris-HCL配成的TBS缓冲液，蛋白质转膜缓冲液也是用Tris加SDS、甘氨酸、甲醇缓冲体系，如果是高于20kd的蛋白则可以使用CAPS缓冲剂，也快吃用Tricine代替甘氨酸。
市场上通常鲁米诺是做成即用型的ECL发光液，德晟生产的鲁米诺是粉末试剂，因为发光试剂对光和温度敏感，粉末试剂更利于保存，需要使用时，现配现用即可，可以根据不同的实验配置不同的浓度，不用采购多种浓度试剂，减少浪费。