笃玛 犬白介素5(IL-5) ELISA 试剂盒 产品简介

笃玛  犬白介素5(IL-5) ELISA 试剂盒  产品简介

常用标签包括有Flag、myc、HA、His、GST、GFP、MBP等。
Flag标签系统利用一个短的亲水性八氨基酸肽（DYKDDDDK）融合到目标蛋白；其纯化条件是非变性的，因此可以纯化所有有活性的融合蛋白。
His标签是由6个组氨酸（His-His-His-His-His-His）组成的短肽，专门设计用于重组蛋白的吸附纯化。由于分子量小，且较容易分离和纯化，是目前使用最广泛的一种。
GST标签体系具有蛋白表达率高，表达产物纯化方便，利于GST抗体制备的特点。GST融合蛋白在水溶液中可溶，可从细菌裂解液中提取，在不变性的条件下通过亲和层析得到。
GFP或其突变体EGFP等广泛用于基因表达效率的检测，以及和目的蛋白融合表达用于检测目的蛋白的表达和分别。GFP抗体不经可以检测GFP或其适当的突变体，也可以检测和GFP或其适当的突变体融合表达蛋白的表达、细胞内定位，以及纯化、定性或定量检测GFP融合表达蛋白等。
Myc标签（序列为：EQKLISEEDL）已成功应用于WB杂交技术、免疫沉淀IP和流式细胞术中。因此可用于检测重组蛋白在细菌、酵母、昆虫细胞和哺乳细胞中的表达情况。Myc重组蛋白质可通过偶联Myc标签抗体到活化的琼脂糖上而进行亲和纯化。但Myc重组蛋白的低pH洗脱条件往往会降低蛋白质的活力，因此Myc标签系统广泛应用于检测但很少用于纯化。
HA标签系统利用一个HA（influenza hemagglutintin epitope:YPYDVPDYA）短肽融合到目标蛋白。HA标签可位于蛋白质的C端或N端，该系统已广泛应用于多种细胞类型，相应的HA标签抗体也被广泛运用。
MBP标签蛋白大小为40kDa，由大肠杆菌K12的malE基因编码。MBP可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。如果蛋白在细菌中表达，MBP可以融合在蛋白的N端或C端。可用MBP抗体或表达的目的蛋白特异性抗体检测MBP标签标记的重组蛋白。
其余标签抗体还有V5、GFP、RFP、β-Actin、β-Tubulin、GAPDH、ERK1、AU1、Avi、B、CBP、DDDDK、E、E2、Glu-Glu、HAT、HPC4、HSV、KT3、KLH、MAT、Protein A、S、S1、SNAP、SRT、NWSHPQFEK、SUMO、T7、Tag-100、TAP、Trx、Ty1、TF、Universal、VSV-G等，但应用相对较少。
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操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
500ng/L 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
250ng/L 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
125ng/L 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
62.5ng/L 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
31.25ng/L 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

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ELISA 实验步骤：
1.包被抗原：稀释液pH 9.6 碳酸盐缓冲液，多肽浓度2ug/ml，0.1ml/孔，4oC过夜，洗净。
2.1%BSA (pH 9.6 碳酸盐缓冲液) 封闭，0.1ml/孔，37oC1h，洗净。
3.稀释抗血清(可稀释不同浓度) 0.1ml/孔，37oC 30分钟，洗净。
4.稀释辣根过氧化物每标记的二抗0.1ml/孔，37oC 40分钟，洗净。
5.显色：TMB显色
A液：四甲基联苯胺10mg 溶于DMF1ml中，再用pH5.0柠檬酸缓冲液稀释100倍.
B液：5ul双氧水加蒸馏水12.5ml 。
终止液：2N硫酸
A液、B液各一滴，比光显色10分钟，终止液一滴。
6.450nm 波长测OD值