笃玛 鸡蛋白聚糖4(PRG4) ELISA 试剂盒 产品说明

笃玛 鸡蛋白聚糖4(PRG4) ELISA 试剂盒  产品说明

ELISA 实验步骤：
1.包被抗原：稀释液pH 9.6 碳酸盐缓冲液，多肽浓度2ug/ml，0.1ml/孔，4oC过夜，洗净。
2.1%BSA (pH 9.6 碳酸盐缓冲液) 封闭，0.1ml/孔，37oC1h，洗净。
3.稀释抗血清(可稀释不同浓度) 0.1ml/孔，37oC 30分钟，洗净。
4.稀释辣根过氧化物每标记的二抗0.1ml/孔，37oC 40分钟，洗净。
5.显色：TMB显色
A液：四甲基联苯胺10mg 溶于DMF1ml中，再用pH5.0柠檬酸缓冲液稀释100倍.
B液：5ul双氧水加蒸馏水12.5ml 。
终止液：2N硫酸
A液、B液各一滴，比光显色10分钟，终止液一滴。
6.450nm 波长测OD值操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
500ng/L 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
250ng/L 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
125ng/L 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
62.5ng/L 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
31.25ng/L 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

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标准样品准备
1． 移取xx微升 标准液（Reagent F）到新的1.5毫升离心管
2． 加入xx微升 稳定液（Reagent B），混匀
3． 放在冰槽里待测

测定准备

1． 准备好待测样品，置于冰槽里
2． 设定好分光光度仪：波长670nm，并置零
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标本要求
1. 血清：
室温血液自然凝固10-20 分钟后，离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保
存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
2. 血浆：
应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20 分钟后，离心20
分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。
3.尿液：
用无菌管收集。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀
形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
4.细胞培养上清：
检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。
5.培养细胞:
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100 万/ml 左右。
通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20 分钟左
右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
6.组织标本:
切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化
后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀
浆器将标本匀浆化。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检
测，其余冷冻备用。
7.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进
行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
8.不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。