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iTRAQ(Isobaric Tag for Relative Absolute Quantitation)和TMT(Tandem
Mass Tags)技术是分别由美国AB Sciex公司和Thermo Fisher公司研发的多肽体外标记定量技术。这两种技术采用多个(2-10)稳定同位素标签,特异性标记多肽的氨基基团进行串联质谱分析,能够同时比较多达10种不同样本中蛋白质的相对含量,可用于研究不同病理条件下或者不同发育阶段的组织样品中蛋白质表达水平的差异。
对于可以传代的细胞样品来说,我们可以采取SILAC的方法完成对于细胞蛋白质组的标记过程,但是许多其他研究体系,比如组织样品以及不能进行传代培养的细胞来说,需要其他的标记方法来完成定量蛋白组学分析。iTRAQ等基于体外(in vitro)标记的定量方法应运而生。
iTRAQ标签包括三部分,如下图:
1. 报告基团(reporter group):指示蛋白样品丰度水平。
2. 平衡基团(balance group):平衡报告基团的质量差,使等重标签重量一致,保证标记的同一肽段m/z相同。
3. 肽反应基团(amine-specific reactive group):能与肽段N端及赖氨酸侧链氨基发生共价连接,从而标记上肽段。
iTRAQ和TMT标签结构图
iTRAQ/TMT定量蛋白组学分析实验流程
iTRAQ
8-plex定量蛋白组学分析流程
iTRAQ/TMT定量蛋白组学分析技术特点
• 高通量定量蛋白分析:可以同时分析10个样品;适合大量临床样本,多对照组大规模实验分析,发现新的生物标记物
• 体外标记,适用于分析组织,细胞,血液等多种样品
• 质谱分析灵敏度高,可检测较低丰度蛋白,大范围比较蛋白相对丰度
• 可与富集磷酸化等修饰肽段的方法联用,更准确研究翻译后修饰变化
iTRAQ/TMT定量蛋白组学分析样品要求
注意:样品运输请使用足量的干冰运输,并且尽量选用较快的邮递方式,以降低运输过程中样品降解的可能性。
中/英文项目报告
在技术报告中,百泰会为您提供详细的中英文双语版技术报告,报告包括:
1, 实验步骤(中英文); 2, 相关的质谱参数(中英文); 3, 鉴定的氨基酸的详细信息; 4, 质谱图片; 5, 原始数据
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