|
牛白介素4(IL-4) ELISA 试剂盒
ELISA试剂盒常见问题解析:
1.加样量不一致?
解决方法:样品稀释前应充分混匀,尽可能使用同一移液器并装紧吸嘴。
2.样品数量多少不一,加样时间有长有短?
解决方法:重复某一样品时,加样时间尽可能与第一次接近。
3.保温时间不一致,洗涤条件不一致,操作人员不一致?
解决方法:重复测定标本,操作条件、人员等应尽可能与上次保持一致,以排除这些因素造成的不一致的可能性。
牛白介素4(IL-4) ELISA 试剂盒
样品测定
1. 移取xx微升 去干扰液(Reagent C)到上述待测样品或标准样品管里,混匀
2. 加入xx微升 反应液(Reagent D)
3. 加入xx微升 显色液(Reagent E),混匀
4. 室温下孵育20分钟
5. 放进微型台式离心机离心3分钟,速度为5000g
6. 移取1毫升上清液到比色皿
7. 即刻放进分光光度仪检测,获得待测样品和标准样品读数
牛白介素4(IL-4) ELISA 试剂盒
标本要求
1. 血清:
室温血液自然凝固10-20 分钟后,离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
2. 血浆:
应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20 分钟后,离心20分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。
3.尿液:
用无菌管收集。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
4.细胞培养上清:
检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。
5.培养细胞:
检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100 万/ml 左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
6.组织标本:
切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PB(PH7.4),或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
7.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
8.不能检测含NaN3 的样品,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。