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EGFP-LC3稳转细胞株构建服务
质粒来源:Addgene #11546 ( 载体pEGFP-C3;插入基因 human LC3B,NM_022818 )
背景:自噬为机体在亚细胞水平的“自我吞噬”,可以帮助细胞维持自身稳态及适应应激环境。近年来,自噬已成为生物学领域中的一个研究热点。迄今研究发现,自噬可以参与多种疾病的发生发展,例如肿瘤,心血管疾病,神经退行性疾病等。因而,自噬在各类相关疾病研究中作为药物筛选靶点越来越受关注和讨论。自噬研究的基础是有效地观察,定量细胞中自噬的发生。而目前应用较为广泛的自噬检测方法为观察GFP-LC3荧光斑,细胞正常生理环境LC3呈弥散状分布,自噬激活时LC3会转移至自噬囊泡上,因此,GFP荧光的弥散或斑点状聚集可以比较准确的反应细胞状态。
优点:EGFP-LC3稳转细胞株可以稳定持续的表达EGFP-LC3,能够有效地解决瞬转实验的效率低,周期长,操作繁琐,不稳定等问题,有利于保证实验结果稳定性与可重复性。
案例:MCF-7/EGFP-LC3