活体成像用生物发光肺癌细胞株

 活体成像技术在肺癌研究领域的解决方案

近年来兴起的活体生物发光成像技术能够让研究人员直接快速的测量各种癌症模型中肿瘤的生长、转移以及对药物的反应。其特点是极高的灵敏度使微小的肿瘤病灶也可以被检测到，比传统方法的灵敏度大大提高了；非常适合于肿瘤体内生长的定量分析；避免由于宰杀老鼠而造成的组间差异；节省动物成本。由于以上特点，使基于转移模型、原位模型、自发肿瘤模型等方面的肿瘤学研究得到发展。建立肿瘤转移模型，可以观察肿瘤转移情况，进一步探讨肿瘤转移的机制；可进行原位接种，观察原位以及原位转移模型，使肿瘤学研究更接近肿瘤临床发病的微观环境。

为促进活体成像技术在肺癌研究领域的应用，我们最近用荧光素酶基因标记了肺癌细胞系SPC-A-1、LTEP-a-2、NCI-H1299（高转移）、NCI-H1975（高转移）以及A549以及其6株骨转移亚系。研究者可以应用这些细胞建立皮下、原位和转移模型进行肺癌相关的研究。

这些细胞均采用逆转录病毒(自制含荧光素酶和GFP的逆转录病毒)进行标记，标记和转染的过程粗略如下：

1.感染前消化细胞并计数，将细胞铺于10cm培养皿中，确保感染前细胞达到20%-30%的汇合度。

2.取4ml含逆转录病毒的培养基，加入40ul 10mg/ml的polybrene混合以0.45um滤膜过滤后加入细胞中。晃匀，37度孵化过夜。

3.移去含有逆转录病毒的培养基，加入10ml完全培养基，37度正常培养12小时。

4.重复2-3步，2-3个循环后用GFP的FACS筛选阳性细胞。

5.阳性细胞系鉴定: 取1×10⁴细胞，用裂解液裂解，加入荧光素酶作用底物，将转染质粒的细胞与阴性，阳性对照共同进行单报告基因检测。