数字PCR突变检测

数字PCR突变检测介绍

数字PCR（digital PCR，dPCR）通过将微量样品进行微滴化处理，即稀释和分液，直至每个细分样品中所含有的待测分子数一般不超过1（0或1）个，将含有核酸分子的反应体系分成成千上万个纳升级的微滴。再将所有微量样品在相同条件下进行PCR扩增反应，使含有目标分子的微量样品中的目标分子增加成千上万倍，产生强的荧光信号，最后对发生了扩增反应的微量样品进行统计，有荧光信号的微滴判读为1，没有荧光信号的微滴判读为0，根据泊松分布原理及阳性微滴的个数与比例即可得出靶分子的起始拷贝数或浓度。

数字PCR技术在稀有突变检测、microRNA表达、无创产前筛查、拷贝数变异、测序文库绝对定量、评估基因编辑效率（GEF）等方面有着很大的应用潜力，未来将会得到进一步的发展。

技术原理

技术优势

1、高灵敏度：通过放大单分子信号，有效消除背景噪音。
2、高准确性：能够实现绝对定量初始模板中的分子数。
3、检测限超低：能够检测出微量突变和低拷贝量分子

与普通荧光定量PCR的区别

传统的实时定量PCR（qPCR）技术依靠标准曲线或参照基因来测定核酸量，是一种相对定量技术。在靶分子数目极少或者模板浓度差异细微时，其检测灵敏度、精确度都受到很大限制。

作为第三代PCR技术的数字PCR，通过精细的微滴化处理，能够直接检测统计目标核酸分子的数目，不再依赖任何参照，可确定低至单个待测核酸分子，实现绝对定量。