酵母双杂交文库构建技术服务

酵母双杂交文库构建技术服务介绍

酵母双杂交技术产生以来，主要应用在以下几个方向：
1、检验一对功能已知蛋白间的相互作用。
2、 研究一对蛋白间发生相互作用所必需的结构域。
3、 用已知功能的蛋白基因筛选双杂交cDNA文库，以研究蛋白质之间相互作用的传递途径。
4、 分析新基因的生物学功能，即以功能未知的新基因去筛选文库。通常依靠报告基因的转录激活来鉴定蛋白相互作用。将一个基因克隆到"诱饵"载体，并和GAL4蛋白的DNA结合域(DBD)表达为融合蛋白。将第二个基因或者编码可能的相互作用子蛋白的cDNA文库克隆到"猎物"载体，同GAL4的转录激活域(AD)表达为融合蛋白。当两个蛋白相互作用时，AD和DBD间距离被拉近，从而激活报告基因的表达。

本服务项目使用infusion重组系统进行重组，使用专利的cDNA合成方法进行cDNA的合成。  

实验步骤  
  1.1.RNA提取 
  1.2.mRNA分离 
  1.3.cDNA合成（使用酶促法直接合成，不经过PCR扩增过程，比SMART方法质量大大提高） 
  1.4.cDNA长度分级
 1.5.分级后的cDNA与酵母双杂载体(pGADT7、pGADT7-REc2、pDEST22、pB42AD、pPR3N等载体，或者客户指定载体)进行infusion重组。 
  1.6.重组后产物电转化感受态细胞 
  1.7.文库铺板检测与菌液保存 
  1.8.文库质粒提取 
  
产品内容 
  我们提供构建好的酵母文库的甘油菌液（含20%甘油的LB培养基），文库甘油菌，随机克隆子的PCR鉴定图谱，文库构建报告，酵母双杂交筛选相关细胞和质粒。 

 
服务周期
 获得合格的总RNA后25工作日，如需转化酵母延长15个工作日。 
  
材料要求 
  客户构建指定的酵母双杂交cDNA文库，由客户提供组织、细胞或总RNA给我们即可：
  细胞样本：细胞数量大于1*10^7 
 动物样本：大于1g 
  物样本：大于2g 
 总RNA：大于200ug