膳食纤维检测试剂盒

1.简介：

膳 食纤维是指碳水化合物及其相类似物质的总和，包括多糖、寡糖、木质素以及相关的植物物质。主要有纤维素、半纤维素、果胶及亲水胶体物质，如树胶、海藻多糖 等组分；另外还包括植物细胞壁中所含有的木质素；不被人体消化酶所分解的物质，如抗性淀粉、抗性糊精、抗性低聚糖、改性纤维素、黏质、寡糖以及少量相关成 分，如蜡纸、角质、软木脂等。

总膳食纤维检测试剂盒是根据AOAC991.43，AOAC 985.29，AACC32-07和AACC 32-05方法开发的，也适用于其它方法，如AACC Method 32-21，AACC method32-06。

 

2.检测原理

脱脂（如大于10%）干燥后的样品经热稳定a-淀粉酶、蛋白酶和淀粉葡萄糖苷酶酶解消化，酶解液通过乙醇沉淀、过滤，乙醇和丙酮洗涤残渣后干燥、称重，得到总膳食纤维（TDF）残渣；

酶解液通过直接过滤、热水洗涤残渣，干燥后称重，得到不溶性膳食纤维（IDF）残渣；

滤液用乙醇沉淀，过滤、干燥、称重，得到可溶性膳食纤维（SDF）残渣。

TDF、IDF和SDF的残渣扣除蛋白质、灰分和空白即得TDF、IDF和SDF含量。

该检测试剂盒的主要优势在于直接提供高纯度的酶，酶的活力是标准化的，而标准化的a-淀粉酶的活力在测量抗性淀粉是公认的。

淀粉葡萄糖苷酶中基本没有纤维素酶，而其他常用的酶制剂中常含有这种污染物，这将导致溶解和低估β-葡聚糖。

该试剂盒提供的酶都是稳定的液体，可以保存到试剂盒有效期，并且是直接应用液，不需要使用前再溶解。

 

3.用途

适用于检测谷物、水果、蔬菜和加工食品中的总膳食纤维（TDF）、不溶性

膳食纤维（IDF）和可溶性膳食纤维（SDF）的检测。

 

4.提供试剂及材料

每一个盒中的提供的酶试剂足够进行200个试验，如另外需要可单独订货：

Bottle 1，1瓶：

热稳定a-淀粉酶（20mL，~ 3,000 U/mL，Ceralpha method；~ 10,000 U/mL on

soluble starch。).

Bottle 2，1瓶：

纯化的蛋白酶(20mL，50 mg/mL; ~ 350 tyrosine Units/mL。)

Bottle 3，2瓶:

淀粉葡萄糖苷酶(20mL，3300 U/mL on soluble starch。)

总计：80ml（4瓶20ml包装）

另外，实验中需要用到硅藻土：

酸洗硅藻土Celite?545，100g或500g包装，（货号：G-CEL100，G-CEL500)

其他相关试剂盒：

膳食纤维质控试剂盒（货号：K-TSCK）

质控试剂盒用于检验酶的效力和纯度，含下表中所列物质每种一瓶，并附有技术数据单(K-TSCK)，盒中每种物质足够10次测试用。

 

5.需要的设备和试剂

5.1设备

A.高型无导流口烧杯：400mL或600mL

B.坩埚：具粗面烧结玻璃板，孔径40-60 μm。清洗后在马福炉中525℃灰化6小时或过夜，用真空泵除去硅藻土和灰分，室温下用2%清洗液浸泡1小时，用水和蒸馏水冲洗干净，用15 mL丙酮冲洗后风干，加1g硅藻土到干燥的坩埚中，在130℃干燥至恒重，在干燥器中冷却1小时，记下坩埚（包括硅藻土）的重量。

C.真空溶剂过滤装置：真空泵或有调节装置的抽吸器，1L的抽滤瓶，侧壁有抽滤口，以及抽滤瓶配套的橡胶塞。用于酶解液的抽滤。

D.恒温振荡水浴：95-100℃

E.分析天平：感量0.1mg

F.天平（台秤）：4 000g量程，感量0.1g

G.马福炉：525±5°C，

H.烘箱：103±2℃，130±3℃

I.真空干燥箱

J.干燥器：二氧化硅或等同干燥剂

K. PH计，具有温度补偿功能。

L.微量凯氏定氮仪。

M.移液器，50-200 μL，5 mL，一次性移液吸头。

N.计时器。

O.橡胶刮勺

P.磁力搅拌器

5.2试剂

A. 95%乙醇（体积比），

B. 78 %乙醇：取821mL95%乙醇置于容量瓶中，用水稀释到刻度，混匀。

C.丙酮

D.蒸馏水或去离子水

E.清洗液Micro (International Products Corp.,Trenton,NJ).，配成2%液体

F. MES/TRIS缓冲液（0.05mol/L）:称取19.52g(MES) (Sigma, M 8250)和14.2 g

(TRIS)(Sigma,T1503)


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膳食纤维检测试剂盒是根据AOAC991.43，AOAC 985.29，AACC32-07和AACC 32-05方法开发的，也适用于其它方法，如AACC Method 32-21，AACC method32-06。

2. 检测原理
脱脂（如大于10%）干燥后的样品经热稳定a-淀FEN酶、蛋白酶和淀粉葡萄糖苷酶酶解消化，酶解液通过乙醇沉淀、过滤，乙醇和丙酮洗涤残渣后干燥、称重，得到总膳食纤维（TDF）残渣；
酶解液通过直接过滤、热水洗涤残渣，干燥后称重，得到不溶性膳食纤维（IDF）残渣；
滤液用乙醇沉淀，过滤、干燥、称重，得到可溶性膳食纤维（SDF）残渣。
TDF、IDF和SDF的残渣扣除蛋白质、灰分和空白即得TDF、IDF和SDF含量。
该 检测试剂盒的主要优势在于直接提供高纯度的酶，酶的活力是标准化的，而标准化的a-淀FEN酶的活力在测量抗性淀粉是公认的。杨树彦 13788987962 QQ：1961275959淀粉葡萄糖苷酶中基本没有纤维素酶，而其他常用的酶制剂中常含有这种污染物，这将导致溶解和低估β-葡聚糖。杨树彦 13788987962 QQ：1961275959该试剂盒提供的酶都是稳定的液体，可以保存到试剂盒有效期，并且是直接应用液，不需要使用前再溶解。
3. 用途
适用于检测谷物、水果、蔬菜和加工食品中的总膳食纤维（TDF）、不溶性
膳食纤维（IDF）和可溶性膳食纤维（SDF）的检测。
4. 提供试剂及材料
每一个盒中的提供的酶试剂足够进行200个试验，如另外需要可单独订货：
Bottle 1 ，1瓶：
热稳定a-淀FEN酶（20mL，~ 3,000 U/mL，Ceralpha method；~ 10,000 U/mL on
soluble starch。).

Bottle 2，1瓶：
纯化的蛋白酶(20mL，50 mg/mL; ~ 350 tyrosine Units/mL。)

Bottle 3，2瓶:
淀粉葡萄糖苷酶(20mL，3300 U/mL on soluble starch。)

总计：80ml（4瓶20ml包装）

另外，实验中需要用到硅藻土：
酸洗硅藻土Celite?545， 100g或500g包装，（货号：G-CEL100，G-CEL500)
其他相关试剂盒：
膳食纤维质控试剂盒（货号：K-TSCK）
质控试剂盒用于检验酶的效力和纯度，含下表中所列物质每种一瓶，并附有技术数据单(K-TSCK)，盒中每种物质足够10次测试用。
 

品种	数量
β-葡聚糖（大麦）	1.0g
高直链玉米淀粉	10.0g
淀粉（小麦）	10.0g
酪蛋白	5.0g
果胶	1.0g

5. 需要的设备和试剂
5.1 设备
A. 高型无导流口烧杯：400mL或600mL
B. 坩埚：具粗面烧结玻璃板，孔径40-60 μm。清洗后在马福炉中525℃灰化6小时或过夜，用真空泵除去硅藻土和灰分，室温下用2%清洗液浸泡1小时，用水和蒸馏水冲洗干净，用15 mL丙酮冲洗后风干，加1g硅藻土到干燥的坩埚中，在130℃干燥至恒重，在干燥器中冷却1小时，记下坩埚（包括硅藻土）的重量。
C. 真空溶剂过滤装置：真空泵或有调节装置的抽吸器，1L的抽滤瓶，侧壁有抽滤口，以及抽滤瓶配套的橡胶塞。用于酶解液的抽滤。
D. 恒温振荡水浴：95-100℃
E. 分析天平：感量0.1mg
F. 天平（台秤）：4 000g量程，感量0.1g
G. 马福炉：525±5°C，
H. 烘箱：103±2℃，130±3℃
I. 真空干燥箱
J. 干燥器：二氧化硅或等同干燥剂
K. PH计，具有温度补偿功能。
L. 微量凯氏定氮仪。
M. 移液器，50-200 μL，5 mL，一次性移液吸头。
N. 计时器。
O. 橡胶刮勺
P. 磁力搅拌器
5.2 试剂
A. 95%乙醇（体积比），
B. 78 %乙醇：取821mL95%乙醇置于容量瓶中，用水稀释到刻度，混匀。
C. 丙酮
D. 蒸馏水或去离子水
E. 清洗液Micro (International Products Corp.,Trenton,NJ).，配成2%液体
F. MES/TRIS缓冲液（0.05mol/L）:称取19.52g (MES) (Sigma, M 8250)和14.2 g
(TRIS) (Sigma,T1503)，用1.7L蒸馏水溶解，用6mol/L氢氧化钠调节PH至
8.2±0.1，加水稀释到2L（注意24℃时PH值为8.2，20℃时PH值为8.3，27-28℃
时PH值为8.1）
G. 盐酸溶液（0.561 mol/L）：取93.5mL 6 mol/L的盐酸，加入700mL水中，混匀
后用水定容到1L。
H. 氢氧化钠
I. PH值标准缓冲液：PH值为 4.0，7.0 和10.0。
6. 酶的纯化和标准化
6.1 根据AACC/AOAC的膳食纤维检测方法，必须确保酶的纯度。
6.1.1 淀粉葡萄糖苷酶被木聚糖酶、纤维素酶和果胶酶污染，会低估β-葡聚糖、
阿拉伯木聚糖和果胶的含量。
6.1.2 热稳定a-淀粉酶被污染，会影响抗性淀粉的测量。
6.1.3 蛋白酶被4-β-葡聚糖酶污染，会低估β-葡聚糖的含量。
6.1.4 如不是使用该的酶，请参考下面方法测定




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