人血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISA试剂盒

血管紧张素Ⅱ(ANGⅡ)ELISA试剂盒

本试剂盒用于测定血清，血浆及相关液体样本中检测指标的含量。

操作步骤：

1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔 10 孔，在第一、第二孔中分别加标

准品 100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液 50μl，混匀；然后从第一孔、第二

孔中各取 100μl 分别加到第三孔和第四孔， 再在第三、 第四孔分别加标准品稀释液 50μl，

混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 弃掉，再各取 50μl 分别加到第五、第六孔

中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液 50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各

取 50μl 分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50μl，混

匀后从第七、第八孔中分别取 50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准

品稀释液 50μl，混匀后从第九第十孔中各取 50μl 弃掉。 （稀释后各孔加样量都为 50μl，

浓度分别为 180pg/ml， 120pg/ml，60pg/ml，30pg/ml， 15pg/ml） 。

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同） 、待测样

品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl（样

品最终稀释度为 5 倍） 。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混

匀。

3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

4. 配液：将 30（48T 的 20 倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30（48T 的 20 倍）倍稀释后备用。

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此

重复 5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。

7. 温育：操作同 3。

8. 洗涤：操作同 5。

9. 显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

15 分钟.

10. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色） 。

11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值） 。 测定应在加终止

液后 15 分钟以内进行。

注意事项：

1． 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未

用完，板条应装入密封袋中保存。

2． 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3． 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好

控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值

大于标准品孔第一孔的 OD 值） ，请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计

3

算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5） 。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6． 底物请避光保存。

7． 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8． 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9． 本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。