人骨特异性碱性磷酸酶B(ALP-B)ELISA试剂盒

产品名称：人骨特异性碱性磷酸酶B(ALP-B)ELISA试剂盒

试剂盒组成：48孔/96孔

保存：2-8℃

主要用途：科研检测

人骨特异性碱性磷酸酶B(ALP-B)ELISA试剂盒检测原理：ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术.

种属包括：人、大鼠、小鼠、豚鼠、仓鼠、裸鼠、兔子、猪、犬、猴、马、牛、羊、鸡、鸭、鱼等等

规格：48T/96T（可提供定性定量）

人骨特异性碱性磷酸酶B(ALP-B)ELISA试剂盒试剂盒组成及试剂配制

1.酶联板（Assay plate ）：一块（96孔）。

2.标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。

3.样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。

4.生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。

5. 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。

6. 生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）

7.辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）

8.底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。

9.浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。

10.终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

 

试剂盒组成

1 酶标包被板 96 孔*1 可拆卸板

2 酶结合物 6ml*1 瓶

3 标准品 1ml*6 瓶

4 显色剂 A 液 6ml*1 瓶

5 显色剂 B 液 6ml*1 瓶

6 终止液 6ml*1 瓶

7 浓缩洗涤液（*100） 50ml*1 瓶

8 封板膜 1 张

9 使用说明书 1 份

备注 1.标准品 1～6 的浓度分别为：0, 250, 500, 1000, 2500, 5000μmol/L

 

操作步骤： 

人骨特异性碱性磷酸酶B(ALP-B)ELISA试剂盒取出试剂盒，室温（20-25℃）放置30分钟。

分组：取出96孔板，根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数，把剩余的板条继续冷藏处理。分别设标准品组（6个浓度）、空白孔、待测样品组。

标准品的稀释：准备小试管6 只，依次编好号码，先在各小试管中加入标准品稀释液100ul，然后取原浓度标准品100ul 加入一只已编好号的试管中，充分混匀;再在该试管中取100ul 加入第二支试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul 加入第三只试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul 加入第四只试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul 加入第五只试管中，充分混匀；然后在该试管中取100ul，弃掉。第六只试管作为0 号标准品。

注：为减少实验误差，保证准确性，建议设置复孔。

加样：依照标准品的顺序分别加入50ul的标准品溶液于空白微孔中；空白对照孔加入50ul的蒸馏水；其余微孔中先加样品40ul然后再加生物素标记的抗体10ul。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。

洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒弃去，如此重复5 次，拍干。

加酶标溶液：标准品组、待测样本组各孔中加入50ul的酶标溶液（空白对照孔除外）。

温育：酶标板用封板纸密封后，放入湿盒内于37℃恒温孵育1小时。

洗板：用稀释后的洗涤液注满每孔，静置15-30s，充分清洗酶标板5次，用吸水纸彻底拍干。

显色：各孔加入显色剂A液50ul后，再加入显色剂B液50ul。

终止：25-37℃下避光反应10-15分钟，加入50ul终止液。

读板：在450nm波长读取各孔的OD值。

注：读板时必须拭干板底残留的液体和手指痕迹，读板时间控制在终止反应后的30分钟内，以免影响准确性。

 

数据计算：人骨特异性碱性磷酸酶B(ALP-B)ELISA试剂盒

以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，即为样品的实际浓度。

 

注意事项：

实验操作中必须使用一次性吸头，避免交叉污染。

加样：加样时，要控制加样速度，避免第一孔与最后一孔间的时间间隔过大，否则将会导致不同的预孵育时间，从而影响实验的准确性以及重复性。

孵育：严格按照说明书上规定的孵育时间和温度进行。

反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化，如果颜色较深，请提前加入终止液终止反应。

建议实验前预测样品含量，如样品浓度过高，应对样品进行稀释，计算结果时乘以相应的稀释倍数。

建议使用本试剂盒时先做预实验（即先做标准曲线，试用几个标本），如果对本试剂盒有任何疑问，可和所购经销商联系，如果因运输过程导致试剂盒失效，可要求调换，但概不承担产品本身以外的任何损失。

 

安全性

1． 避免人体直接接触显色剂A、B和终止液。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。

2． 实验中不要进食、抽烟或使用化妆品。

3． 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

供应产品信息
人骨特异性碱性磷酸酶B(ALP-B)ELISA试剂盒