siRNA载体构建实验服务

一、siRNA载体构建概述
    RNA干扰（RNAi）是一种运用双链RNA(dsRNA)分子实现基因的沉默，在植物和动物中都广泛存在的一种基因调控机制。导入细胞内的双链RNA在Dicer酶的作用下形成21-23核甘酸长siRNA, siRNA双链结合一个核酶复合物从而形成RNA诱导沉默复合物(RNA-inducedsilencingcomplex，RISC)与mRNA结合诱导mRNA切割，从而调节基因的表达。其应用于包括功能基因组学、药物作用靶点筛选和细胞信号通路等研究中，并且逐步成为病毒性疾病、遗传性疾病以及肿瘤等的基因治疗研究的一种手段。

图1：siRNA作用机制
 

    本公司siRNA载体技术服务的基本原理就是将表达siRNA的双链DNA插入到启动子下面，导入细胞后，启动子启动siRNA的表达并在Dicer核糖核酸酶的作用下产生具有活性的siRNA。

 
二、目前siRNA的来源主要包括化学合成，体外转录，siRNA载体（质粒载体或病毒载体）等，siRNA载体与其他方法相比，具有以下技术优势：
   1、siRNA载体是DNA，与RNA相比更加稳定，易控制。
  2、含有GFP的siRNA载体可以更好的监测转染效率。
   3、siRNA载体上带有筛选标签及筛选抗性基因，可用于稳定细胞系的建立。
 
三、技术服务内容
 1、siRNA载体的选择：本公司的siRNA载体分为质粒载体和病毒载体，同时载体上带有GFP及筛选抗性基因可供选择。
 2、设计siRNA序列：根据目的mRNA序列设计三条siRNA序列及阴性对照序列。
 3、模板合成：合成每条编码siRNA的单链DNA模板，退火形成DNA双链。模板链后面连接RNA PolyIII聚合酶转录终止位点，且两端分别设计酶切位点。
 4、空载体和模板酶切，连接、转化及克隆鉴定。
 5、siRNA载体技术服务报告提交.

四、客户提供：
    靶基因的mRNA序列、NCBI登陆号及所属物种等与构建siRNA载体相关的信息。

五、实验服务报告内容
  1、siRNA载体及含该质粒的细菌各一份；
  2、载体图谱、测序结果各一份；
  3、siRNA载体技术服务所需试剂耗材、仪器设备、操作过程各一份；

六、实验服务周期及收费标准：咨询本公司

七、质量承诺： 保证构建的siRNA载体沉默效率大于70%