蛋白质组学综合服务（iTRAQ/SILAC/DIGE/SILAC-IP/CO-IP/2-DE）

       辉骏生物自成立以来，一直致力于蛋白质组学的研究，已经帮助广大客户完成了蛋白质组学的研究，并成功发表了SCI论文。目前我司的主要业务包括：蛋白质组学综合技术服务，双向电泳，iTRAQ,SILAC,DIGE,SILAC-IP,免疫共沉淀，分子生物学，载体构建和改造服务，慢病毒包装，稳定细胞株构建服务等

服务简介

 iTRAQ (Isobaric tag for relative and absolute quantitation）采用液质联用的方法高通量地检测多组别间的蛋白质表达差异。蛋白质酶切成多肽后，用iTRAQ同位素试剂标记多肽N末端或赖氨酸侧链基团。标记后的多肽经过液相色谱分离，进行一级质谱和二级质谱分析，在二级质谱前，被标记的不同样本中的同一多肽表现为相同的质荷比和其他理化性质；在二级质谱中，多肽被破碎后产生不同的信号离子，信号离子表现为不同质荷比(113～119，121)的峰。根据波峰的高度及面积，可以鉴定出蛋白质，并分析出同一蛋白质在不同组别中的定量信息。

技术优势

1、 高通量，可同时对8个样本进行分析

2、 体外标记，适用范围广

3、 分离能力强，定量结果可靠

4、 高灵敏度，检测限低，可检测出低丰度蛋白

5、 自动化程度高：液相与质谱连用，分析速度快

服务内容

1、  蛋白提取与定量

2、  iTRAQ试剂标记

3、  液相分离、质谱鉴定和定量分析

4、  数据库检索和蛋白质定量分析 

5、  生物信息学分析

n  成功服务案例

【研究目标】

硫酸软骨素（CS）大量应用于骨关节炎的治疗，导致CS的大量商品化，而生物体本身可以产生CS，这为CS的大量生产提供了一条途径。大肠杆菌K4菌株能产生一种硫酸软骨素类似物，它构成了大肠杆菌的荚膜多糖（CPS）。在酸性条件下，大肠杆菌的硫酸软骨素类似物可以转变为CS。据文献报道，SlyA可以激活大肠杆菌K5荚膜基因簇的整体表达，而K4、K5在荚膜基因簇的差异很微小，因此理论上SlyA也可以激活K4荚膜基因簇的表达。此实验的主要目的是验证SlyA对K4菌株的作用。

【实验流程】

1). 构建携带SlyA基因的原核载体。

2). 取2份大肠杆菌K4菌株，一份转化携带SlyA基因的载体，使得SlyA过表达；一份K4菌株作为   正常对照。

3). 2组菌株以相同的接种量接种到发酵罐进行发酵。

4). 通过qPCR验证：SlyA的过表达导致了K4荚膜基因簇的过表达。

5). 通过咔唑法比较2组菌株荚膜多糖（CPS）的产量。

6). 通过iTRAQ技术找到SlyA过表达K4菌株和对照K4菌株的差异表达蛋白。

7).  对这些差异蛋白进行生物信息分析。

【实验结果】

    处理组菌株的CPS产量是对照组的1.5-3.8倍，质谱鉴定发现处理组77种蛋白的表达量提高了、143种蛋白的表达量降低了。KEGG分析表明此菌株的糖酵解、TCA循环过程减弱，而与荚膜多糖合成有关的蛋白质表达水平出现了上升，证明SlyA基因可能通过激活与CPS合成有关的蛋白质而提高了CPS的生物产量。

【参考文献】

Wu, Q. et al. Transcriptional engineering of Escherichia coli K4 for fructosylated chondroitin production. Biotechnology progress 29, 1140-1149 (2013).