Pull down实验技术服务

一．Pull down 概述
在Pull down实验中，带标签的诱饵蛋白能被特异结合该标签的固相亲和配基捕获，形成“次级亲和支持物”，用于纯化与诱饵蛋白相互作用的其他蛋白。纯化产物洗脱后，经Western blot验证或LC-MS/MS，即可证明或鉴定与诱饵蛋白互作的蛋白。

二．Pull down实验流程

图1. Pull down流程示意图

三．Pull down实验流程
1、构建含His或GST标签的诱饵蛋白原核表达载体；

2、原核表达诱饵蛋白（我们采用自诱导培养基培养细菌，能有效降低包涵体的形成）；

3、细菌裂解液过柱，带标签的诱饵蛋白被固相化亲和配基捕获，产生“次级亲和支持物”；

4、待测样品裂解液过柱孵育，与诱饵蛋白互作的蛋白被“次级亲和支持物”吸附；

5、清洗，离心，去除未结合的杂蛋白；

6、洗脱，得到诱饵蛋白及其互作蛋白的复合物；

7、如要验证某蛋白X与诱饵蛋白互作，则将6.所得的蛋白复合物与X蛋白的抗体孵育，做Western blot验证即可；

8、如要寻找诱饵蛋白可能的互作蛋白，则需将6.所得的蛋白复合物做LC-MS/MS鉴定；

图2. Pull down实验流程

四．生物信息学分析

GO注释统计

Pathway分析

五．Pull down实验服务内容

1、原核表达载体构建；

2、融合蛋白的诱导表达与纯化；

3、pull down捕获互作蛋白；

4、Western blot验证或LC-MS/MS鉴定互作蛋白；

5、数据检索、生物信息学分析；

6、结果分析与报告整理。

六．pull down技术服务须知

为保证pull down实验顺利进行，请告知您的研究背景和目的，并提供目的蛋白对应的mRNA序列或对应基因的NCBI登录号，及拟用的融合标签。

七．实验周期及费用：请咨询我司。