AAV 肝脏基因表达或敲除技术服务

AAV-TBG-Cre系列

AAV8-TBG-Cre

AAV8-TBG-EGFP-T2A-Cre

AAV8-TBG-mCherry-T2A-WGA-Cre

AAV8-TBG-CreERT2

AAV8-TBG-EGFP-T2A-CreERT2

AAV8-TBG-mCherry-T2A-CreERT2

AAV-TBG-GOI定制

(示例说明)

AAV8-TBG-P53

AAV8-TBG-PTEN

AAV8-TBG-YAP

AAV8-TBG-β-catenin

AAV8-TBG-HNF4α

Alb-Cre和Alb-CreERT

TBG-Cre

组织/细胞特异性

Alb启动子，在肝实质细胞和前体细胞中均有转录活性。

TBG启动子，仅在成熟的肝实质细胞中有转录活性。

Alb-Cre，由于发育中肝前体细胞中有短时转录活性，其中一部分细胞可分化为胆管上皮细胞，导致部分胆管上皮细胞非特异性表现。

TBG-Cre，只在成熟肝实质细胞中表达Cre，目前被认为是肝细胞特异性敲除的金标准。

Alb-CreERT，除了在肝前体细胞内的短时转录活性外，诱导剂他莫昔芬有一定肝毒性，可引起肝细胞发生胆管反应，降低肝细胞特异性。

腺相关病毒载体

腺病毒载体

慢病毒载体

病毒参数

无包膜

直径20~30nm

ssDNA病毒

基因组4.6~6kb

无包膜

直径70~90nm

dsDNA病毒

基因组25~45kb

有包膜

直径90~110nm

dsRNA病毒

基因组~9kb

感染整合

不整合到宿主细胞基因组

不整合到宿主细胞基因组

随机整合至宿主细胞基因组

表达稳定性

长时间稳定表达

瞬时表达，不稳定

长时间稳定表达

安全性

低免疫原性

不整合至宿主基因组，不会诱发基因失活或激活癌基因　

高免疫原性

不整合至宿主基因组，不会诱发基因失活或激活癌基因　

低免疫原性

随机整合，可能导致宿主细胞基因失活或癌基因被激活

转染效率　

rAAV8对肝脏感染率可达100%

小鼠肝脏感染率~60%

小鼠肝脏感染效率低。

AAV-TBG-GOI

AAV-TBG-Cre

cKO/KI

操作流程

1. 基因载体构建（简单）

2. AAV-TBG-GOI病毒制备

3. 尾静脉注射

4. 开展下游实验研究

1.  通过常规基因打靶技术获得cKI/KO小鼠

2. AAV-TBG-Cre病毒现货

3. 尾静脉注射

4. 开展下游实验研究

1. 基因载体构建（复杂，工作量大）

2. 胚胎干细胞获得

3. 同源重组，筛选阳性胚胎干细胞

4.  移植阳性胚胎干细胞至受体胚胎，得嵌合体小鼠

5. 至少经过两代遗传获得纯合体小鼠

6.  与Alb-Cre或Alb-CreERT小鼠杂交，得杂合小鼠

7. 筛选鉴定，待小鼠成年，开展下游研究

耗时

1个月获得AAV-TBG-GOI病毒，尾静脉注射后1-2周肝脏特异表达，即可开始下游实验。

1-2周即可开始下游实验

从Alb-Cre小鼠和cKI/KO小鼠杂交计算，至少需要2个月。

条件要求

极低，提供基因名称，即可获得病毒

低，有cKI/KO小鼠，直接购买病毒即可

高，必须同时有cKI/KO小鼠和Alb-Cre（ERT）小鼠

可控性

基因导入时间可控，基因表达细胞数量可通过病毒滴度控制

基因敲入/敲除时间可控，基因敲入/敲除细胞数量可通过病毒滴度控制

模型一旦构建，基因敲入/敲除立即生效，所有细胞均一化，无法控制数量和比例。

效果

肝细胞特异性表达外源基因

肝细胞特异性敲入/敲除靶基因

在肝脏敲除/敲入靶基因，特异性差（表1）

成本

低

低

高