Renilla luciferase之底物腔肠素Coelenterazine

 Renilla luciferase之底物腔肠素Coelenterazine

CAS 编号：55779-48-1

货号：luc006

分子式：C26H21N3O3  

分子量: 423.48g/mol

纯度：98%

保存：-20°C避光，保存在惰性气体下

Coelenterazine，在水生生物中（例如海肾、海蜇、水螅等）发现的天然腔肠素可作为很多荧光素酶（包括海肾荧光素酶Rluc）的作用底物，可用于活细胞中钙离子浓度检测、报告基因分析、BRET（生物发光共振能量转移）研究、ELISA、HTS、组织或细胞中超氧阴离子和过亚硝酸盐的化学发光检测。

与甲虫荧光素/荧光素酶系统不同，腔肠素/荧光素酶系统不需要三磷酸腺苷(ATP)，因此更便于体内生物荧光的研究。目前研究得最透彻的以腔肠素为底物的荧光素酶来源于海肾（Renilla）， 即海肾荧光素酶 (Renilla Luciferase，简称Rluc)。  活体成像实验中除FireflyLuciferase外，有时也会用到Renilla Luciferase（海肾荧光素酶，编码基因是Rluc），底物正是coelentarizine。作用原理是以腔肠素为底物的荧光素酶在有分子氧的条件下，氧化腔肠素产生高能量的中间产物， 并在此过程中发射蓝色光，所发的光波长在 460~540nm左右。发光的波长低于firefly luciferase的，而且特异性也不好。但是，如果实验设计需要标记两种细胞（比如一种肿瘤细胞和一种干细胞）或者标记一种细胞一种基因，就需要有两种可以分别检测的报告基因。Firefly luciferase和renilla luciferase正好可以满足这样的要求，可以分别用不同的底物（D-luciferin，potassium salt和Coelenterazine）分别激活发光。

腔肠素也是以水母发光蛋白为代表的海洋发光蛋白的辅助因子。在一个以荧光素/荧光素酶系统为基础略作改变的系统中，水母发光蛋白稳定的结合了处于反应状态的腔肠素，氧化反应在水母发光蛋白与钙离子结合后开始进行。这种对钙离子的反应是不依赖于氧气的，水母发光蛋白所发射的蓝色光的量和酶浓度及Ca++ 浓度成正比。这种特性使得腔肠素可作为荧光素酶、氧气及钙离子的检测试剂。 水母发光蛋白/腔肠素系统与荧光钙离子指示剂相比，在检测钙离子方面具有以下优点： 可检测较大范围的钙浓度 – 从0.1uM 至 >100uM；样品无自体荧光，背景荧光低于使用荧光钙离子指示剂；虽然信号比使用荧光钙离子指示剂弱，但是通过成像仪器可以得到更高的信噪比，因此具有更高的灵敏度。由于水母发光蛋白复合体不会被运输到细胞外，所以可进行数小时至数天的钙离子的观测。