AdvCell® 成软骨分化培养基

 AdvCell^® 成软骨分化培养基（BCDS0001﹚本产品适用于间充质干细胞成软骨诱导分化使用， 产品进行哺乳生物来源的间质干细胞成软骨诱导时能够有效提高诱导效率。产品是在GMP条件下制备，通过微生物检测（细菌、真菌、霉菌及支原体）、pH检测、渗透压以及内毒素测试。

★ 产品号   

 Cat No : BCDS0001

★ 产品组成

★ 产品适用范围

 适用于人及哺乳类来源的间充质干细胞成脂分化试验，间充质干细胞包括骨髓、脐带以及脂肪来源的干细胞。

★ 培养条件

     37℃，5％ CO₂  无菌恒温培养。

★ 操作步骤

 遵守常规细胞培养的一般准则，将 BCDS0001 中BCDM0001、BCSM0001、BASS0001A三组分在使用前37℃解冻之后混合成成软骨分化半完全培养基。

【成软骨诱导】

1.完全培养基的配置：将AdvCell® 成软骨分化添加物 B（BASS0001B） 按1:100与以上成软骨分化半完全

 培养混合成完全培养基， 每次混合的量视具体情况而定，完全培养基配置之后在12小时之内使用。

2.按每团成软骨的细胞数为2.5X10⁵个计算所需的细胞量，将所需的间充质干细胞转移到培养管中后，用半

 完全培养基淋洗细胞。150g 室温离心5min后收集细胞，并将细胞按7.5x10⁵ 个／ml重新悬浮于 半完全

 培养基。150g 室温离心5min后收集细胞，并将细胞按5x10⁵个／ml重新悬浮于完全培养基。

3.将0.5 ml(2.5x10⁵个)悬浮的细胞接到15 ml 聚丙烯管中，150g 室温离心5min后并不吸走上清或重悬细

 胞。旋松管盖让气体可以进入管中，37度5%CO₂静置24小时。

4.每2-3天跟换一次新鲜培养基，跟换时要小心操作以便不破坏管底的细胞团，但是要使细胞团处于自由悬

 浮状态。

5.14-28天之后收获软骨团，并将软骨团用福尔马林固定。

6.福尔马林固定后将软骨团用石蜡包埋法包埋。

7.Alcian Blue染色：脱石蜡水化后用Alcian Blue 溶液室温染色30分钟。自来水淋洗2次之后光学显微镜

 下观察染色结果。