AdvCell® T细胞无酚红无血清培养基

  AdvCell^®  T细胞无酚红无血清培养基（BTSFM0002）为哺乳生物来源的T细胞培养而设计的， 培养基包含必需和非必需氨基酸、维生素、有机和无机化合物、激素、生长因子、微量矿物质、血清替代物以及其他补给成分。一方面，鉴于培养基无酚红特性，在细胞培养过程中若需检测光吸收， 可排除酚红的干扰；另一方面，在培养细胞之后获得的上清液可直接用作美容护肤品添加物。产品严格无菌，无病毒和支原体，性能稳定的核心是采用无血清替代物为细胞提供一个营养全面和平衡的环境，不仅包括T细胞生长的一切养分，还包括促进T细胞吸附、活化、增殖的添加物，产品适用于人及哺乳类动物T细胞的培养、活化及增殖。

★ 产品号   

    Cat No : BTSFM0002

★ 产品组成

★ 产品适用范围

    适用于人及哺乳类来源的T 细胞培养。

★ 培养条件

 37℃，5％ CO₂  无菌恒温培养。

★ 操作步骤

1.培养皿的包被：按一个10-cm培养皿的表面积计算，将2 ml AdvCell^® 细胞垫（BCP0001）与20 µl

  AdvCell^® T细胞吸附物（BTA0010混合后加入培养皿中，4℃下包被过夜。

2.按常规免疫细胞培养的一般准则，如需在生物反应器或培养袋中高密度培养，应优化条件来确定最佳的

 操作步骤。使用前将BTSFM0002中的4种组分按如下体积比在37℃下解冻之后混合混合成完全培养基:

  500 mL AdvCell^®  免疫细胞无酚红基本培养基（BICBM0002）、20 mL AdvCell^® 免疫细胞添加物A

 （BICS0001A）、1 mL AdvCell^® 免疫细胞添加物B（BICS0001B）、1 mL AdvCell^® T细胞添加物

 （BTS001）。

3.准备新鲜的外周血单个核细胞（PBMC），或根据标准的外周血单个核细胞解冻程序，在37℃的水浴，快

 速解冻（〈1 分钟）冻存的外周血单个核细胞。用生理盐水洗涤细胞，根据需要也可加入2-5％热灭活

 的人自体血浆。用电子（即 Coulter 计数器，VI-细胞）或手动的方法（即血球计数仪）给细胞计数。

 离心细胞，清除洗涤缓冲液。

4.培养初期，用完全培养基重悬PBMC，CD3⁺ T 细胞密度保持在大约0.5-1×10⁶/ml，转移细胞到相应的细

 胞培养容器（培养袋、培养瓶）。5％CO₂ 的潮湿培养箱中培养细胞，给予并维持细胞在对数期生长所需

 要的营养。为了保持细胞在对数期的增长，当细胞密度超过1×10⁶/ml抗原呈递细胞。无论培养T 细胞

 的规模大小，细胞均可被隔离，激活和扩大。在37℃ 时，需要分离传代，维持细胞密度在0.5-1×

  10⁶/ml（例如，2×10⁶个细胞/ml 以上，按1：4 比例0.5×10⁶ 细胞/ml）。在静态平板培养中为了获得

 最佳的气体交换，建议培养基深度不超过1 到1.2 cm。