AdvCell® DC细胞优化培养基

 AdvCell^®  DC细胞优化培养基（BDSFM0003）为哺乳生物来源的DC细胞培养而设计的，培养基包含必需和非必需氨基酸、维生素、有机和无机化合物、激素、生长因子、微量矿物质、血清替代物以及其他补给成分。产品严格无菌，无病毒和支原体，性能稳定的核心是采用无血清替代物及细胞培养优化添加物为细胞提供一个营养全面和平衡的环境，不仅包括DC细胞生长的一切养分，还包括促进DC细胞吸附、活化、增殖的添加物，产品适用于人及哺乳类动物DC细胞的培养、活化及增殖。

★  产品号   

   Cat No ：BDSFM0003

★ 产品组成

★ 产品适用范围

    适用于人及哺乳类来源的DC 细胞培养。

★ 培养条件

    37℃，5％ CO₂  无菌恒温培养。

★ 操作步骤

1.按常规免疫细胞培养的一般准则，如需在生物反应器或培养袋中高密度培养，应优化条件来确定最佳的

 操作步骤，将BDSFM0003中4种组分AdvCell^®  免疫细胞基本培养基（BICBM0001）、AdvCell^® 免疫细

 胞添加物A（BICS0001A）、AdvCell^® 免疫细胞添加物B（BICS0001B）、AdvCell^® 细胞培养优化

 添加物（BCOS0001），在使用前37℃解冻之后混合，做成半完全培养基。

2.准备新鲜的外周血单个核细胞（PBMC）。将外周血单个核细胞铺在培养瓶中，加入适量以上半完全培养

 基，在37℃，5% CO₂ 的恒温培养箱中孵育2-3 小时，弃掉含非贴壁细胞的培养基。用生理盐水洗涤贴

 壁细胞 （主要是CD14⁺单核细胞）三次之后，加入新的半完全培养基。并按10-cm培养皿的表面积添加

  20 µl AdvCell^® DC细胞添加物A （BDS001A）的量，加入AdvCell^® DC细胞添加物A （BDS001A），以

 此培养基培养贴壁细胞，保持细胞度在1～3×10⁵ 细胞/cm² 之间。研究者可视情况加入灭活的人自体

 血浆。

3.在37℃，5% CO₂ 的潮湿培养箱中连续孵育5天，建议培养3天左右更换一次新的添加有AdvCell^® DC

 细胞添加物A （BDS001A）培养基，换液过程保留贴壁和不贴壁的所有细胞。培养6天之后，细胞表现

 出典型的树突状细胞的形态和表面标记（细胞CD1a、CD80、CD86、HLA-DR）。

4.诱导成熟DC细胞：按10-cm培养皿的表面积向培养皿中添加20 µl  AdvCell^® DC细胞添加物B

 （BDS001B），以诱导树突状（DC）细胞的成熟。