AdvCell® CIK细胞优化培养基

  AdvCell^®  CIK细胞优化培养基（BCSFM0003）为哺乳生物来源的CIK细胞培养而设计的，培养基包含必需和非必需氨基酸、维生素、有机和无机化合物、激素、生长因子、微量矿物质、血清替代物以及其他补给成分。产品严格无菌，无病毒和支原体，性能稳定的核心是采用无血清替代物及细胞培养优化添加物为细胞提供一个营养全面和平衡的环境，不仅包括CIK细胞生长的一切养分，还包括促进CIK细胞吸附、活化、增殖的添加物，产品适用于人及哺乳类动物CIK细胞的培养、活化及增殖。

★ 产品号   

    Cat No : BCSFM0003

★ 产品组成

★ 产品适用范围

   适用于人及哺乳类来源的CIK细胞的诱导与培养。

★ 培养条件

37℃，5％ CO₂  无菌恒温培养。

★ 操作步骤

1.培养皿的包被：按一个10-cm培养皿的表面积计算，将2 ml  AdvCell^® 细胞垫（BCP0001）与20 µl

  AdvCell^® 细胞吸附物（BTA001）混合后加入培养皿中，4℃下包被过夜。

2.按常规免疫细胞培养的一般准则，如需在生物反应器或培养袋中高密度培养，应优化条件来确定最佳的

 操作步骤。使用前将BCSFM0003中的4种组分按如下体积比在37℃下解冻之后混合混合成半完全培养

 基: 500 ml AdvCell^® 免疫细胞基本培养基（BICBM0001）、20 ml AdvCell^® 免疫细胞添加物A

 （BICS0001A）、1 ml AdvCell^® 免疫细胞添加物B（BICS0001B）、AdvCell^® 细胞培养优化

 添加物（BCOS0001）。

3.从患者50 ml全血经淋巴细胞分离液分离，获得约5×107个单个核细胞。 将细胞悬浮于30 ml以上

 半完全培养基中，细胞浓度为约1.5-2.0×10⁶/ml。

4.按10 ml加入20 µl的量，加入AdvCell^® CIK细胞添加物A（BCIKS001A）。于37℃，5％CO2培养箱

 条件下培养。培养24小时后（也可在培养开始），加入AdvCell^® CIK细胞添加物B（BCIKS001B）。

5.过3-4天后按10 ml加入20 µl的量加入AdvCell^® CIK细胞添加物C（BCIKS001C）。 

6.在5-6天，加入等倍体积的新鲜半完全培养基，并按10ml加入20 µl的量补加AdvCell^® CIK细胞添加

 物C（BCIKS001C）。 

7.在7-14天，每天根据培养基颜色变化，确定是否需要添加新鲜的半完全培养基，并相应补加AdvCell^®

  CIK细胞添加物C（BCIKS001C）。可以多个培养瓶，也可加入培养袋培养。 

8.培养至10 d，要求检测细菌真菌培养阴性；台盼兰拒染试验活细胞＞95％。 

9.在第13、14天（d13，d14），取1×10⁵个细胞做流式检测细胞亚型，并收集细胞悬液离心去上清后，

 再用含2 g/L白蛋白IL-2 100 IU/ml的生理盐水洗涤2次，最后将细胞悬于400 ml含20 g/L白蛋白