AdvCell® 哺乳细胞快速扩增无血清培养基

  AdvCell^® 哺乳细胞快速扩增无血清培养基（BFRM0002）根据哺乳类生物细胞的生长需要，包含必需和非必需氨基酸、维生素、有机和无机化合物、激素、生长因子、微量矿物质、优选的胎牛血清以及其他补给成分。产品严格无菌，无病毒和支原体，性能稳定，使用该培养基能使干细胞在理想营养平衡状态下进行多代扩增而不发生分化（至少在10代以内）。

★ 产品号

    Cat No : BFRM0002

★ 产品组成

★ 产品适用范围

     适用于贴壁哺乳细胞的培养与快速扩增，细胞类型包括成纤维细胞、内皮细胞等可增殖的原代细胞，以及各种细胞系等。

★ 使用注意事项

1.完全培养基的制备：将以上AdvCell^® 哺乳细胞快速扩增无血清培养基（BFRM0002）中的AdvCell^® 哺

 乳细胞基本培养基（BMSM0001）、AdvCell^® 细胞垫 （BCP0001）、AdvCell^® 哺乳细胞培养添加剂A

 （BMCS0001A） AdvCell^® 干细胞培养添加物 B（BMCS0001B）于37℃ 解冻并迅速混合。

2.完全培养基的存储：配制好的完全培养基放在4℃冰箱避光保存，并尽量在一个月内使用完。

3.根据需要，培养过程中可添加一定剂量青霉素∕链霉素(P∕S)。

★ 培养条件

    37℃，5% CO₂，无菌恒温培养。

★ 细胞培养

【复苏】

1.把完全培养基放入37°C水浴中预热；

2.从液氮中取出哺乳细胞迅速放入37°C水浴快速解冻（解冻后不要继续孵育细胞）；

3.在超净台中加入5 ml的 完全培养基重悬细胞，1000 rpm离心5 min；

4.弃上清,加入5 ml的完全培养基重悬细胞，转移到T-25细胞培养瓶中（带滤芯）；

5.将培养瓶置于37℃，5% CO₂ 的无菌培养箱中培养；

6.第二天用新鲜的完全培养基给细胞换液。

【传代】

1.在显微镜下观察细胞，当细胞融合度达到80%时，即可传代培养；

2.37℃水浴预热培养基；

3.在超净台中，弃掉T-25细胞培养瓶中的培养基，加入2 ml PBS清洗，再加入1 ml 0.25%胰酶-EDTA消

 化细胞；

4.在显微镜下观察到细胞变圆，有细胞开始脱离瓶壁时，即可加入5 ml 完全培养基终止消化；

5.用移液器轻轻吹打瓶壁上剩余的细胞，并轻轻吹打将细胞吹散；

6.将细胞转移至15 ml离心管中，1000 rpm离心5 min；

7.弃上清,加入15-20 ml的 A完全培养基重悬细胞后转入T-75细胞培养瓶中或按适当比例接种到T-25细胞培养瓶中（确保细胞贴壁后融合度在25-50%之间），细胞密度在1×10⁴ cells/cm² (2.5×10⁵ cells/T-25 瓶），混合细胞悬液，确保细胞均匀分布；

8.将培养瓶置于37℃，5% CO₂ 的无菌培养箱中培养；

9.每两天用新鲜、预热的完全培养基进行换液。