免疫学：流式细胞术检测

1、检测指标：
DNA倍体分析、DNA含量分析、细胞周期、细胞凋亡；细胞表面抗原分析：淋巴细胞免疫分型、白血病及淋巴瘤免疫分型、血小板相关抗体分析、PNH相关抗原检测（CD55/CD59）、胞内细胞因子检测等。
2、样本及来源：
1) 细胞数量达到检测所需（细胞周期1x10⁶、细胞凋亡3x10⁶）,生长良好，无污染，附有细胞生长照片，注明实验检测项目所需试剂盒；来源于人、小鼠、大鼠或其它。
2) 外周血：EDTA或肝素抗凝全血，5ml左右；来源于人、小鼠、大鼠或其它。
3）试剂：部分常用荧光探针，如PI等，我公司可免费提供；特殊标记物，如CD抗体等，用户须另行购买，我公司可以代购；用户所提供抗体应可与样本发生特异性识别反应。
4）样品包装要求：细胞培养在培养瓶中或操作前样本于合适的条件保存。
3、收费标准：

检测说明：
1、用户需要进行流式细胞仪检测时须提前预约，同时说明实验目的、方法等。最低收费300元。
2、我公司在正式接受实验委托一周内交付实验结果。所提供实验结果忠实于样本的实际情况。
3、用户须一次性全额预付实验费。
4、由用户提供的样品或试剂所致的实验问题由用户负责。
5、请在表中说明检测具体要求，由于填写资料不详所致任何问题由用户负责。
6、请在送样的同时提供样本来源及处理方法等信息，样品检测后原则上本公司不负责保存。

                         附：流式细胞术检测样品推荐制备方法
A. 直接标记抗体（FITC标记抗体）：
(1)收集1×10⁶个细胞，800rpm离心5min，4℃以上冷PBS洗一次。
(2)用4%多聚甲醛1ml室温固定40分钟，800rpm离心5min去上清。加2ml PBS重悬洗涤细胞，800rpm离心5min。
(3)用1ml含5% 人血清的 PBS 重悬细胞，冰上孵育10min，800rpm离心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和饱和剂量的荧光标记抗体(5×10⁵个细胞/20ul抗体)的PBS ,避光冰上放置30min,离心弃上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定，待测即可。
(4)用流式细胞仪检测荧光值,每管计数10,000.00个细胞。
B. 未标记抗体间接免疫荧光标记法：
(1)收集2×10⁶个细胞，用冷的PBS 2ml 洗涤细胞一次，800rpm离心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室温固定细胞40min,800rpm离心5min；2ml PBS重悬细胞，800rpm离心5min；
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重悬细胞，冰上放置10min,800rpm离心5min。
(4)加入饱和剂量未标记抗体，冰上放置40min,800rpm离心5min，用2ml冷的PBS 重悬细胞，800rpm离心5min，洗去未结合一抗，重复一次。
(5)加入荧光标记（FITC）标记的二抗，冰上避光放置40min后，800rpm离心5min，去上清，PBS洗涤两次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重悬细胞；固定待测。
(7)流式细胞仪检测荧光值,每管计数10,000.00个细胞。
C.细胞周期、细胞凋亡及DNA倍体分析样品（PI染色）的制备：
(1)待测样本制成单细胞悬液，然后200g离心5分钟，弃上清。
(2)用4℃预冷的70%冷乙醇固定，4℃保存，至少固定18小时。
(3)调整细胞浓度为106细胞/毫升，取1毫升细胞悬液，用PBS洗三次，细胞重悬于1毫升PI染液中，37℃孵育30分钟即可进行流式分析。
(4)PI染液终浓度为50微克/毫升，RNase A终浓度为20微克/毫升。

实验具体收费、标本的收集、实验试剂的定购等事宜，请联系嘉美生物。
实验预约热线：400-698-4168   010-58464308   010-58464306
实验预约邮箱：jiamei_bj@126.com   info@jiamay.com

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