分子生物学：RT-PCR实验（逆转录PCR实验）

反转录PCR（Reverse transcriptase PCR,RT-PCR）是一种从RNA扩增cDNA拷贝的方法。RT-PCR对于获得与克隆mRNA的5’、3’末端序列和从非常少量的mRNA样品构建大容量的cDNA文库方面都是极为灵敏与通用的方法。此外，RT-PCR还易于鉴定已转录序列是否发生突变及呈现多态性，还可用于测定基因表达的强度。我公司采用二步RT-PCR法，可满足客户不同的实验要求。

服务内容：
1. 以总RNA或mRNA为模板逆转录成cDNA。 
2. PCR扩增看家基因检测cDNA合成的效率。 
3. 目的基因的克隆及测序。

样品要求：
1. 如果提供的材料为总RNA，请提供足量的并且保证纯度的总RNA(浓度500 ng/μl以上，体积20μl以上）。
2. 如果提供的材料为细胞或组织，应保证材料新鲜，动物细胞数为10⁷以上，动物组织为100mg以上。

3. 提供的样品要新鲜并尽可能多，不推荐提供RNA样品，或者提供cDNA，并尽可能详细的提供背景资料（基因序列、Genebank accession number扩增产物的用途等）。

终产品：
实验报告（包括实验方法、照片等）；cDNA；PCR产物。

服务说明：
实验材料必须保证新鲜，请您采样后立即放入液氮中速冻。

基本步骤：
● 模板制备：见RNA提取技术服务。
● 引物合成：客户提供上、下游引物，或者我公司提供免费的引物设计及合成（包括RT-PCR半定量检测中的内参引物）。
● 反转录
（1）Microtube管中配制下列模板RNA/引物混合液，全量<15 μl。

42℃保温1小时。 
（5）70℃保温15分钟后冰上冷却，得到cDNA溶液。
若需要表达，参考基因表达服务。若需要进行RT-PCR半定量分析，接着以下的操作。
● RT-PCR半定量分析
PCR扩增目的基因及看家基因，产物经过琼脂糖凝胶电泳后进行灰度扫描分析。

实验具体收费、标本的收集、实验试剂的定购等事宜，请联系嘉美生物。
实验预约热线：400-698-4168   010-58464308   010-58464306
实验预约邮箱：jiamei_bj@126.com   info@jiamay.com

中国生命科学实验技术服务、定制高端平台——嘉美生物实验技术中心

嘉美生物是一家主要从事Annexin V,信号转导抗体,重组人和动物蛋白,磷酸化抗体,各种动物ELISA试剂盒,生物实验服务等研发与销售的高科技生物公司。