基于TMT的蛋白质组学分析

Tandem mass tags, TMT技术是用Thermo公司开发的串联质谱标记技术，主要用于鉴定和定量不同样品中的蛋白质。每种TMT标记试剂由：具有胺反应活性的NHS-酯基团，质量标准化基团和MS/MS报告基团组成。每个标记试剂的同位素标签具有相同的前体质量，试剂标记酶解后的肽段，可与氨基酸N端及侧链的伯胺基团发生反应，再通过报告基团进行检测TMT技术最多可采用11种稳定同位素标签，可同时比较多达10种不同样本中蛋白质的相对含量，可标记

多通路磷酸化蛋白质组学

蛋白质磷酸化修饰是一种可逆的蛋白质翻译后修饰，其中蛋白质的氨基酸残基通过加入共价结合的磷酸基而被蛋白激酶磷酸化。磷酸化修饰会改变蛋白质的结构构象，导致蛋白质被激活、失活，或被改变功能。研究蛋白磷酸化有助于了解生命活动，且有助于阐述与蛋白磷酸化异常有关的疾病的机制。由于磷酸化修饰的蛋白质在生物样本中含量低、动态范围广，利用定量蛋白组学分析手段对磷酸化蛋白样品进行定量分析前，需要对磷酸化肽段进行富集从

甲基化定量蛋白组学研究

甲基化修饰（Methylation）是最常见的蛋白质翻译后修饰之一。甲基化多发生在转录因子和组蛋白上，也有少量胞质蛋白会发生甲基化修饰。甲基化可发生在精氨酸（R）和赖氨酸（K）残基上，包括单甲基化、对称/非对称二甲基化和三甲基化等。精氨酸甲基化可调控RNA加工、基因转录、DNA损伤修复、蛋白质转位及信号转导等过程。赖氨酸甲基化可调控组蛋白功能及参与基因转录的表观调控。利用针对不同甲基化位点和修饰形式的特异性抗体对甲基

酰化定量蛋白质组研究

酰化修饰是蛋白质的一种翻译后修饰。细胞重要中间代谢产物，酰基-CoA类化合物，作为供体直接参与生物体内的蛋白酰化修饰，从而调控多种重要生物学过程，如表观遗传、能量代谢、蛋白转运和互作等等。蛋白质酰化修饰是目前生命科学研究的热点之一。在蛋白质酰化修饰中，最早发现和研究最多的是乙酰化修饰，近几年来又发现了丙酰化、丙二酰化、戊二酰化、琥珀酰化、巴豆酰化等多种酰化修饰。酰化定量蛋白质组研究通过对不同生理或病理

基于Top down自上而下法的PTMs表征

自上而下Top down MS可全面分析蛋白质翻译后修饰，因为自上而下法无需水解即可分析完整的蛋白质或肽。因此，在单克隆抗体和重组蛋白等蛋白质生物类药物的分析中，该策略可以保留在鸟枪法下使用CID裂解分析时丢失的大部分不稳定修饰信息。基于Top down自上而下法的PTMs表征通过ECD和ETD进行Top down自上而下质谱分析法，在测定完整的蛋白质或肽质量、定量多种修饰蛋白质形式、绘制有较高覆盖率的修饰图谱、鉴定未预测的PTMs以及确定

多肽质谱鉴定

多肽是由一系列氨基酸组成的化合物分子。它们与蛋白质结构类似，在血压调节，痛觉缺失，葡萄糖代谢等生理过程中均有重要作用。但多肽的大小远比蛋白质要小。内源多肽多是由前体蛋白经过各种加工酶的裂解生成。在特定生理条件下对所有表达的多肽进行的研究，称为多肽组学（peptidomics）。多肽鉴定的目的是为了实现“Peptide-Spectrum Matches”，简而言之，对多肽的序列信息进行检测，从而获取多肽的序列或翻译后修饰信息。串联质

多肽生物标志物鉴定

生物标志物是一种可以被测量和评估的特征，可作为正常生物学过程、病理过程或治疗干预的药理学反应的指标，多肽可作为理想的生物标志物。由于多肽可以在生物体的各个部位之间进行迁移，因此许多致病过程可以通过不同体液中多肽组成的特征、病理学变化来反映，与各种疾病有关的多肽丰度变化可以被检测到。有两种常见的肽类生物标志物的研发模式：模式识别和单/寡生物标志物检测。模式识别法，不需要获得候选生物标志物的身份信息，

基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

所有经由HLA-I、II分子呈递在细胞表面，供T细胞检测识别的短肽，称为免疫多肽组（Immunopeptidome）。免疫多肽组学分析，旨在研究I型和II型免疫肽的动力学和组成。免疫多肽组学的深入表征可以应用于癌症、免疫疾病和传染病的新疗法的开发。免疫肽是由有核细胞在HLA或MHC抗原呈递途径的I型和II型蛋白上提交的全部肽。它在细胞介导和体液反应中定义免疫原性表位是必不可少的。确定免疫肽的特性能够帮助我们发现个性化癌症免疫治疗的

绝对定量分析（AQUA）

AQUA绝对定量分析是一种靶向定量蛋白质组学技术，在各类定量蛋白质组学研究中应用广泛。绝对定量策略可用于蛋白质及其修饰状态的绝对定量。将稳定同位素标记的合成肽作为内标，可以模拟蛋白水解形成的天然肽，也可以利用共价修饰（如，磷酸化，甲基化，乙酰化等）来制备。通过在串联质谱中使用选择反应监测分析（selected reaction monitoring, SRM），将AQUA内标肽用于蛋白水解后精确定量地测定蛋白质和翻译后修饰蛋白质的绝对水

平行反应监测PRM服务

平行反应监测（PRM）是一种基于高分辨率和高精度质谱的离子监测技术。PRM技术的原理与SRM/MRM的原理类似，但在分析方法的开发中，PRM更常用于对蛋白质和多肽进行绝对定量。PRM技术能实现复杂样品中的attomole级别的多种蛋白质的检测。平行反应监测（PRM）PRM是以Q-Orbitrap为基础的四极杆高分辨率质谱检测平台。与SRM每次执行一次跃迁不同，PRM通过前体离子对每次跃迁执行全扫描，也就是说，同时监控前体离子的所有碎片：首先，PRM

石蜡包埋样品蛋白质组学

用于蛋白质组学质谱分析的动物样品主要以新鲜组织、血液、尿液和细胞为主。石蜡包埋的样本，特别是临床上的石蜡包埋样本，具有病史清楚、诊断明确、临床资料详尽等优点，能长期稳定室温保存，对疾病的研究具有极高的应用价值。因此，针对石蜡包埋样本的蛋白质组学研究，在疾病机理研究、生物标志物发现，尤其是罕见病的研究中具有十分重要的意义。百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合nanoLC-MS/

外泌体蛋白质组学

外泌体是直径为30-150 nm的常见细胞囊泡（EVs）之一。它们主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中，例如组织和各种生物体液，包括血清/血浆、脑脊液和尿液（体内）。此外，外泌体也可以在体外存在于一定条件下的培养基中。细胞囊泡在各类生理过程中具有重要的功能，与一般的细胞囊泡相比，我们仍然不清楚外泌体在临床生物标志物领域的功能。随着外泌体分离技术的发展，人们

糖蛋白分析

质谱技术用于糖蛋白分析，可以分析糖型、糖基化位点和蛋白质的定量。百泰派克生物科技提供基于质谱的糖蛋白分析服务。糖蛋白糖蛋白指发生了糖基化修饰的蛋白质，糖基化指碳水化合物通过共翻译或翻译后修饰的方式附着到蛋白质上的过程。分泌的细胞外蛋白常被糖基化。糖蛋白通常是重要的整合膜蛋白，在细胞和细胞的相互作用中发挥作用。糖链可以在细胞中的两个位置处附着到蛋白质上，在内质网一般产生N-糖蛋白，在高尔基体一般产生O-

细胞表面蛋白质组学

细胞表面蛋白质是一类特殊的蛋白质。它们具有十分重要的功能，如管理细胞功能以及通过转运代谢产物、离子、其他溶质等在细胞与环境之间进行通信。细胞表面蛋白质在不同细胞类型之间有所不同。此外，即使是特定的细胞类型，它也可以在正常或患病状态下发生改变。因此，有许多关于细胞表面蛋白的重要应用，例如区分细胞表型和疾病状态，用于预后和治疗靶标等的研发。细胞表面呈现出各种疾病的关键生物标志物和潜在药物靶标。目前，开

DIA-PRM蛋白质组学

DIA（data-independent acquisition）指数据非依赖型扫描模式，是基于静电场轨道阱Orbitrap的一种全息式的质谱数据采集模式。相对于DDA（数据依赖性的扫描模式），DIA技术将质谱整个扫描范围分为若干个窗口，对每个窗口中的所有离子进行选择、碎裂、检测，具有更好的准确性和可重复性。PRM（parallel reaction monitoring）是一种基于高分辨率和高精度质谱的离子监测技术，是目前靶向蛋白质组学数据采集的主流方法，通过对特异性肽

PCT-DIA蛋白质组学

PCT（Pressure Cycling Technology）压力循环技术是一项高效的生物样品制备技术，是美国PBI公司开发的一项专利技术。它利用常压和超高（液）压（35,000PSI或更高)之间压力交替循环，可重复地破碎细胞，可实现从各种样品（人类、动物、植物和微生物来源的细胞和组织）中提取蛋白质等重要生物分子。DIA（data-independent acquisition）是基于静电场轨道阱Orbitrap的一种全息式的质谱数据采集模式，是一种数据非依赖型扫描模式。相对

原代细胞培养实验

材料：动物组织块 无菌操作注意事项1、操作前洗手，进入超净台后手要用75%酒精或0.2%新洁尔灭擦试。试剂等瓶口也要擦拭。2、点燃酒精灯，操作在火焰附近进行，耐热物品要经常在火焰上烧灼，金属器械烧灼时间不能太长，以免退火，并冷却后才能夹取组织，吸取过营养液的用具不能再烧灼，以免烧焦形成碳膜。3、操作动作要准确敏捷，但又不能太快，以防空气流动，增加污染机会。4、不能用手触已消毒器皿的工作部分，工作台面上用品要布

糖蛋白分析

糖基化修饰不仅影响蛋白质的空间构想、生物活性、运输和定位，而且在分子识别、细胞通信、信号转导等特定生物过程中发挥着至关重要的作用。随着蛋白药物的迅速发展，单抗药物迅速发展，作为大分子糖蛋白药物，单抗药物的糖基化修饰对其稳定性、有效性和安全性等各方面均有不同程度的影响，因此对其糖基化修饰进行全面表征具有十分重要的意义。对于单抗药物这种大分子蛋白类药物要对能够影响其有效性及安全性的初级或二级结构进行评

HILIC-UHPLC分析N-聚糖键

糖苷键很少对糖蛋白的功能产生影响，因此通常不需要确定。然而，糖蛋白的聚糖结构高度复杂，评估N-糖的糖苷键的构型和位置对分析糖蛋白的结构是有帮助的。已知有五种常见的N-聚糖键，最常见的是N-乙酰氨基葡糖与天冬酰胺（GlcNAcβ1-Asn）连接。与Asn连接的其他类型包括：哺乳动物和古生菌的层粘连蛋白中的葡萄糖，古生菌中的N-乙酰半乳糖胺（GalNAc），鼠李糖素细菌。也有报告显示，葡萄糖在甜玉米中与精氨酸连接。HILIC-UHPLC分

N-糖基化位点分析

N-糖基化是一种涉及多种生理和病理过程的蛋白翻译后修饰。糖基化修饰位点的可变性是细胞活性的关键指标，血清蛋白糖基化附着位点的减少与先天性糖基化疾病(CDGs)的严重程度之间的相关性证明了这一点。因此，为了充分了解蛋白糖基化对人体健康的影响，准确确定位点占用率具有重要意义。为了确定糖基化附着位点，通常在重水里面使用蛋白n-糖苷酶F（PNGase F）从蛋白质中分离多糖，在此过程中，原先糖基化的天冬酰胺经历脱酰胺化成为