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代谢组学
代谢组学(Metabolomics)是在后基因组学时代兴起的以代谢组为研究对象的一门跨领域科学,旨在研究生物体、器官、组织甚至单个细胞受外界刺激、病理变化以及基因突变等产生的全部小分子代谢物成分及其动态变化,以揭示生物体响应不同层面变化的分子机理。代谢组学的研究内容主要就是对机体代谢网络中产生的小分子代谢物质进行定性定量鉴定。进行代谢组学分析的实验流程主要包括代谢物样本提取与分离、检测与鉴定、数据处理与生物学
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pull down和免疫共沉淀的区别
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)可在体外检测两种蛋白质之间特定相互作用的存在。Co-IP在非变性条件下裂解细胞,保留了许多细胞内蛋白质相互作用。如果蛋白质 X 能与抗体特异结合,那么与蛋白X相互结合的蛋白Y会通过蛋白X与抗体的特异性识别一起沉淀下来。通过研究蛋白质 Y,可以确认蛋白质 X 和 Y 之间的相互作用。在Co-IP分析中,诱饵蛋白和猎物蛋白呈天然构象状态,其相互作用发生在体内,受外部影响较少,且不需
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组蛋白甲基化检测
组蛋白(Histones)是由H1、H3、H2A、H2B和H4五种蛋白组成的蛋白质,存在于真核生物体细胞的染色质中,因富含碱性精氨酸和赖氨酸而呈碱性,可与酸性的双螺旋DNA结合成DNA-组蛋白复合物。在甲基化转移酶的催化下,组蛋白的精氨酸和赖氨酸N末端可以发生甲基化。组蛋白甲基化可以调控基因转录,调控结果取决于甲基化残基和甲基化程度。因此,研究组蛋白甲基化的方式和程度具有重要的生物学意义。组蛋白甲基化检测主要检测组蛋白是否发
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蛋白质磷酸化位点分析
蛋白质磷酸化是一类由蛋白激酶催化的重要的蛋白质翻译后修饰,是在蛋白激酶的作用下,三磷酸腺苷(ATP)或三磷酸鸟苷(GTP)的末端磷酸分子断裂并与底物蛋白氨基酸残基共价结合的过程。蛋白质磷酸化位点分析主要研究蛋白质磷酸化发生在肽链的几号位氨基酸上以及发生在何种氨基酸上。可通过磷酸酶法或串联质谱测序法进行检测,将样品蛋白进行酶解,得到肽段混合物,然后特异性识别并富集发生磷酸化的肽段,再对该肽段的氨基酸序列进
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蛋白质磷酸化检测的经典方法32P
放射性标记是一种传统的蛋白质磷酸化检测技术。该方法利用被32P标记的ATP对细胞进行培养,进而使磷酸化蛋白质通过细胞代谢被32P标记上,然后将提取的蛋白样品进行凝胶电泳或色谱分离,最后通过放射自显影进行检测,实现蛋白质磷酸化的鉴定。该方法检测灵敏度高、结果直观。但由于丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸等的磷酸化和去磷酸化代谢速率不同,对某些磷酸化转化速率较低的蛋白质可能检测不到;且存在放射性污染,对环境有一定的危害。
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蛋白质甲基化质谱
蛋白质甲基化是常见的蛋白质翻译后修饰,主要发生在组蛋白和转录因子蛋白上,部分细胞质蛋白也可发生甲基化修饰。在甲基转移酶的作用下,甲基酶促转移到蛋白质的某个残基上,如赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸和天冬酰胺等,发生甲基化修饰。蛋白甲基化质谱分析就是利用质谱技术检测蛋白是否发生甲基化,以及在哪个氨基酸位点发生何种甲基化。其基本原理是利用液相色谱串联质谱将分离、富集得到的甲基化肽段进行分析,再根据质谱
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蛋白鉴定
蛋白鉴定就是对蛋白样品的基本理化参数以及属性等进行分析鉴定,是蛋白分析中最基础的一步。蛋白鉴定的内容主要包括蛋白质相对分子质量、分子结构、蛋白等电点以及蛋白序列等。随着大规模的基因组测序、生物质谱技术和生物信息学的快速发展,蛋白鉴定的方法也发生了很大的变化,使大规模蛋白质组研究成为现实。其中生物质谱技术以其优越的灵敏度、极高的分辨率和快速简单的操作方法成为蛋白鉴定分析的首选技术。百泰派克生物科技采
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