SILAC技术和免疫共沉淀法结合质谱联用技术

SILAC技术和免疫共沉淀法结合质谱联用技术-详情"免疫共沉淀（Co-IP）是基于免疫学原理研究蛋白质相互作用的经典方法，通过使用靶蛋白特异性抗体来间接捕获与特定靶蛋白结合的蛋白，从而识别生理相关的蛋白-蛋白相互作用，并可通过质谱技术来鉴定新的相互作用蛋白质。SILAC（Stable isotope labeling using amino acids in cell culture）细胞培养条件下稳定同位素标记技术是一种基于同位素标记的蛋白定量技术。SILAC方法使用体内新

shotgun和TMT

shotgun和TMT-详情"Shotgun鸟枪法蛋白质组学是一种自下而上的蛋白质组学分析策略，这种分析策略将完整蛋白质酶解消化为小分子肽段，通过液相色谱进行分离后进行串联质谱分析，根据质谱数据信息如肽段母离子的质荷比（m/z）等结合生物信息学软件进行数据分析，以实现蛋白/多肽序列以及含量分析等。TMT串联质量标签是一种典型的Shotgun基于鸟枪法的蛋白质标记定量技术。同位素标记包括用合成的含有轻或重同位素的试剂化学修饰靶肽，

shotgun策略蛋白质分析

shotgun策略蛋白质分析-详情"Shotgun鸟枪法蛋白质组学分析是指利用高效液相色谱和质谱联用技术，使用自下而上的蛋白质组学策略鉴定复杂混合物中的蛋白质。鸟枪法蛋白质组学zuì常见分析策略是先酶解消化混合物中的蛋白质，然后用液相色谱（LC）法分离酶解产生的多肽，被分离的肽段在质谱仪中解离成带电荷的离子，通过串联质谱分析获得相应的质谱数据，利用生物信息学软件结合相应蛋白质数据库质谱数据进行分析，从而实现蛋白质的定

SEC检测

SEC检测-详情"SEC尺寸排阻或凝胶色谱是一种特别适用于高分子量物质的分离分析技术，其使用多孔材料作为固定相，液体作为流动相，多孔材料的孔径约为50-3000Ǻ，与许多分子的大小相似。在这种技术中，分离是根据溶质分子的大小进行的，溶质分子根据多孔材料孔径的大小穿透球形材料。小分子比大分子渗透得更快，大分子经常被排除在小孔之外，这导致分子通过色谱柱的速度不同从而实现不同分子的分离。SEC检测是zuì被大众认可的测定大

sec蛋白分析

sec蛋白分析-详情"尺寸排阻色谱SEC是一种基于组分分子尺寸的色谱分离技术。利用 SEC，分子可按其在溶液中的尺寸从大到小依次分离。非常大的分子将被排出柱床， 在死体积内zuì先洗脱；大小适中的分子依据其体积的不同可以不同程度地渗透进微孔中；而zuì小的分子在微孔结构中扩散zuì深，从而zuì后洗脱。与其他色谱模式不同，SEC 的分离不依靠分析物和色谱柱固定相之间的任何化学作用。这是从多种干扰物（包括聚集体、赋形剂、细

sec测蛋白纯度

sec测蛋白纯度-详情"尺寸排阻色谱（Size exclusion chromatography，SEC）也称为体积排阻色谱、分子筛色谱或凝胶过滤色谱，是所有色谱技术中zuì温和的一种液相色谱。SEC根据分子大小差异通过填充在色谱柱中的树脂对其进行分离，这种树脂是一种多孔的球形颗粒，当水溶液样品进入色谱柱时，大小介于孔径之间的分子可以渗透到孔隙中，洗脱时间较长；而大于孔径的分子无法进入孔隙，只能从颗粒间隙流过，因此会zuì先被洗脱出来。SEC

SDS-PAGe可以跑出蛋白纯度吗

SDS-PAGe可以跑出蛋白纯度吗-详情"SDS-PAGE聚丙烯凝胶电泳是一种基于分子质量的高分辨率大分子化合物电泳分离技术，被测物由于相对分子质量不同导致其在凝胶中的迁移速率不同而分离开来。根据SDS-PAGE电泳的原理可知，SDS-PAGE可以间接判断蛋白质样品的纯度，将未知纯度的蛋白质样品进行SDS-PAGE凝胶电泳，观察电泳结束后产生的蛋白条带，若凝胶上有且仅有一个蛋白条带，则说明该蛋白样品只含有一种蛋白质；反之，若观察到不止一个

sds-page鉴定目的蛋白质

sds-page鉴定目的蛋白质-详情"SDS-PAGE十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种zuì常用的高分辨率分析分离电泳技术。电泳通过施加电场使带电分子在基质中移动，在这种技术中，影响带电分子迁移率的因素包括其本身的相对分子量、电荷以及结构等。SDS-PAGE用阴离子去污剂对待检测样品进行初始变性，赋予所有待测分子与其分子量成比例的负电荷，再结合聚丙烯酰胺凝胶可以消除结构以及电荷的影响，使待测物质仅根据其分子量的差异进行

SDS-PAGE电泳鉴定抗体纯度

SDS-PAGE电泳鉴定抗体纯度-详情"抗体是免疫系统响应进入体内的外来分子而产生的宿主蛋白质。这些外来分子被称为抗原，它们被免疫系统的分子识别并产生能够结合特定抗原的抗体。抗体由B淋巴细胞产生，并在血液和淋巴液中循环，特异性结合并清除外来抗原。抗体可制造成探针，用于在各种研究和诊断应用中检测感兴趣的分子，一些新型的蛋白类抗体药物便由此产生。抗体生产是指产生可用的特异性抗体的整个过程，包括免疫原制备、免疫、

sds-page测定蛋白质纯度

sds-page测定蛋白质纯度-详情"SDS-PAGE是一种根据分子量分离蛋白质的凝胶电泳分析技术。当蛋白质通过凝胶基质电泳分离时，较小分子量的蛋白质受到来自凝胶基质的阻力更小，电泳时迁移速度更快。影响蛋白质在凝胶基质中的迁移速率的其他因素还包括蛋白质的结构和电荷，在SDS-PAGE中，十二烷基硫酸钠（SDS，又称十二烷基硫酸钠）和聚丙烯酰胺凝胶的使用很大程度上消除了结构和电荷的影响，蛋白质的分离完全基于多肽链的长度。蛋白质

SDS-PAGE分析

SDS-PAGE分析-详情"SDS-PAGE（sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis）十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳是Ulrich K. Laemmli开发的一种不连续电泳系统，常用于分离和鉴定分子量在250 kDa之内的蛋白质混合物。十二烷基硫酸钠（SDS，也称为十二烷基硫酸钠）和聚丙烯酰胺凝胶的联合使用可以消除结构和电荷的影响，使蛋白质仅根据其分子量的差异进行分离，常用于复杂蛋白质混合物的高分辨率分离实验。SD

pull-down实验和免疫共沉淀足够证明分子互作吗

pull-down实验和免疫共沉淀足够证明分子互作吗-详情"Pull-down实验和免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）都是研究蛋白质分子相互作用的常用方法。根据二者的实验原理可知，理论上是可以证明蛋白质与蛋白质之间的相互作用的。但是，根据两种技术的局限性也不难排除以下情况：Co-IP可能无法检测到蛋白质之间的低亲和力或短暂的相互作用；再者检测结果不能确定交互作用是直接的还是间接的，因为不能排除其他蛋白在中间起桥梁

pull down蛋白质谱

pull down蛋白质谱-详情Pull Down是一种利用体外亲和纯化方法确定两种或多种蛋白质之间的物理相互作用的方法，既可用于确认由其他研究技术（例如，共免疫沉淀）预测的蛋白质-蛋白质相互作用的存在，也可作为鉴定以前未知的蛋白质-蛋白质相互作用的初始筛选测定法。理解蛋白质结构和功能的第yī步是确定哪些蛋白质相互作用，从而确定相关的细胞生理途径。Pull Down已经成为通过对感兴趣的蛋白质-蛋白质相互作用研究细胞途径的宝贵工

PTM位点

PTM位点-详情蛋白质翻译后修饰（PTM）是指蛋白质特定氨基酸残基共价结合官能基团的过程，其通过改变蛋白质的物理和化学性质、折叠、构象、稳定性和活性等从而修饰蛋白质的功能，在各种细胞过程中起着重要作用。蛋白质所结合的官能基团的类型以及发生修饰的氨基酸位点即PTM位点密切影响其生物学功能，大多数蛋白质类药物通过某种形式的PTM传递其治疗效果，分析鉴定蛋白类药物的PTM位点有助于我们理解其发挥药效的生理机制，也为其体

PTM蛋白分析

PTM蛋白分析-详情PTM蛋白质翻译后修饰参与大多数细胞生理过程，包括蛋白质结构和完整性的维持、代谢和防御过程的调节，以及细胞识别事件和形态变化等。 PTM蛋白分析是阐明细胞事件复杂过程如细胞分裂、生长和分化等的基础。蛋白质翻译后修饰的多样性以及复杂性给PTMs的分析带来了许多挑战，传统上，可通过埃德曼降解、氨基酸分析、同位素标记或免疫化学等技术来鉴定PTMs。近年来，质谱被证明在PTM发现中jí其有用。蛋白质中共价修

ptm质谱

ptm质谱-详情翻译后修饰（Post-translational modification，PTM）普遍存在于大多数蛋白质中，蛋白质在合成过程中或合成后在相关酶的作用下共价结合功能基团或蛋白质的过程就称为蛋白质翻译后修饰，它通过影响蛋白质的结构等调节蛋白质的生物活性、定位、折叠以及与其他细胞分子如蛋白质、核酸和脂质等的相互作用，赋予了蛋白质组丰富的生物学功能多样性，在正常的生命活动过程中扮演着重要的角色，研究表明一些疾病的发生也与蛋白

PRM组学分析

PRM组学分析-详情PRM是一种质谱技术的数据采集模式，其通过高分辨率、高质量分析器质谱平台对一级质谱筛选的所有目标化合物离子进行检测，以实现目标化合物的精准定量分析。具有高通量、高分辨率以及高准确性的优点，是靶向定量蛋白质组学研究中的强有力工具。基于PRM的组学分析shǒu先要明确目标对象，然后根据目标对象设计和建立合适的PRM质谱采集方法对待测样品进行PRM数据采集，将得到的原始谱图数据结合理论数据库或相关分析

PRM和DDA

PRM和DDA-详情PRM与DDA为两种不同的质谱数据采集模式。PRM（Parallel Reaction Monitoring）平行反应监测是相对于传统SRM建立起来的高分辨率离子检测技术，是目前靶向定量蛋白质组学数据采集的主流方法。PRM基于Q-Orbitrap为代表的四级杆-高分辨率质谱平台对每一个母离子产生的所有碎片离子进行全扫描，平行监测了每一个母离子产生的所有离子对，可以对目标化合物进行高分辨、高精度的相对或jué对定量。DDA（data-dependent acqui

prm蛋白验证需要多少组

prm蛋白验证需要多少组-详情PRM（Parallel Reaction Monitoring）平行反应监测技术是目前靶向定量蛋白质组学数据采集的主流方法，它基于高分辨、高精度的两个偶联质谱仪能够对目标蛋白质或肽段进行选择性检测以实现对靶向蛋白质或肽段的相对或jué对定量。PRM质谱分析技术shǒu先利用四级杆质量分析器通过一级质谱选择性地检测目标蛋白肽段的母离子信息，将母离子在碰撞池中进行裂解后再利用高分辨、高质量精度分析器对母离子窗口

PRM-LC-MS-MS

PRM-LC-MS-MS-详情LC-MS液相色谱串联质谱技术是将色谱技术与质谱技术结合起来，将色谱分离后的化合物进行单级质谱分析，单级质谱只将化合物电离一次，如果使用MALDI软电离电源，化合物被电离为准分子离子，而很少有碎片离子，通常只能提供化合物的分子量信息用于定量分析而无法获得其结构信息进行定性。如果使用EI电离源，可以通过碎片离子峰提供分子结构信息进行定性鉴定。LC-MS-MS液相二级质谱在一级质谱分析的基础上将经过第yī